中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)是我国重要的经济蟹种,养殖规模大,经济效益高。但其基础理论研究显得较为匮乏,促雄性腺素(Androgenic gland hormone,AGH)作为中华绒螯蟹性别调控的重要激素,国内外未见其分离、纯化以及更深层次的报道。本研究通过分离、纯化获得中华绒螯蟹促雄性腺素纯品,并得到其cDNA全长序列,主要开展了如下工作:1、解剖获得中华绒螯蟹促雄性腺(Androgenic gland AG),经蛋白提取获得促雄性腺素初提物,将该初提物进行凝胶过滤层析,得到的凝胶过滤图谱和本实验室原有的实验结果相似,目的峰保持了较高的一致性;将凝胶过滤分离得到的组分经冷冻干燥浓缩后,进行SDS-PAGE检测,分别使用非氨银染法和考马斯亮蓝染色法,成功得到分子量大小约为15 KD的目的蛋白。2、将目的蛋白进行De-novel测序,得到了两条肽段的氨基酸序列,分别命名为肽段1、肽段2,分子量大小分别为1810.89 D和1198.69 D;根据肽段1的氨基酸序列设计简并引物,通过RACR技术首次获得了中华绒螯蟹促雄性腺素的全长cDNA序列,该序列由一个长度为94bp的5’UTR,一个390bp的开放阅读框(ORF)和一个235 bp的3’UTR组成,在3’-非编码区Poly(A)上游15bp处存在一保守的聚腺苷酸信号(AATAAA)。开放阅读框编码的蛋白质由129个氨基酸组成,命名为Es-AGH,分子量为14037.14 D,并且其中包含了用于设计简并引物的肽段1。3、利用生物信息学软件对目前已知的甲壳动物促雄性腺素前体(AGH precursor),类胰岛素促雄性腺因子(insulin-like AG factor)以及Es-AGH进行分析,探讨它们的氨基酸理化特性、信号肽、跨膜结构域、二级结构、motif等,并利用Phyre软件对其三级进行同源性收索。结果显示:促雄性腺素前体包含信号肽,存在跨膜结构域,并和信号肽同位。PDB库中没有找到匹配的motif。促雄性腺素前体的二级结构有比较高的相似性,都包含两个中心螺旋区。Phyre搜索显示,它们的三级结构匹配的均为胰岛素家族的蛋白,这也进一步证实了促雄性腺素前体和胰岛素原的相似性。Es-AGH预测结果并没有信号肽,但其二级结构显示其包含AGH precursor的功能螺旋区,这也初步验证了Es-AGH的可信性。本研究通过对中华绒螯蟹促雄性腺素分离纯化研究,得到纯品的促雄性腺素;并通过De-novel测序、RACE技术获得其全长cDNA序列,其所编码的蛋白命名为Es-AGH,由129个氨基酸组成;通过生物信息学技术,比较促雄性腺素前体和类胰岛素促雄性腺因子的结构特性,分析促雄性腺素前体和类胰岛素促雄性腺因子的保守性,以及二者的差异,并验证了Es-AGH的可信性。