赭曲霉毒素A(OTA)是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的有毒代谢产物,主要分布于谷物、谷物产品、干果和水果中,具有肾脏与肝脏毒害、致畸性和致癌性等危害,对人类健康具有潜在威胁。因此,建立快速、高效的OTA检测方法具有重要意义。本论文针对OTA及其产生菌的检测方法进行了系统研究。首先,建立了 OTA的HPLC 定量检测方法:选用 KromstarTM HPLC 反相 C18 柱(250×4.6 mm,5μm),以水(pH 2.4):乙腈=45:55(V/V)作为流动相,柱温30℃,激发波长333 nm、发射波长460 nm,OTA含量在10～2000 ng/mL范围内线性关系良好。其次,优化了固相萃取小柱对样品进行前处理的淋洗液及洗脱液。最终淋洗液选用2 mL 50%甲醇,洗脱液用2 mL 100%甲醇,处理后OTA的回收率为87%～94%。利用CYA及YES培养基对实验室保藏菌种以及从葡萄园中分离纯化的菌株进行筛选,得到6株产OTA菌株,对其中编号为1062的未知菌株进行形态及分子生物学鉴定,结果显示该菌株为黑曲霉。为找到产OTA的关键基因,利用分子生物学手段建立快速鉴定产OTA菌株的方法,将产OTA的模式菌株A.niger CBS513.88中的34个pks基因与不产OTA的模式菌株A.niger ATCC1015的基因组进行比对,并对其中3个差异基因与1062菌株的转录组数据库进一步比对,结果显示2个基因表达有差异。经PCR验证,确定An1 5g07920基因为产OTA的必要基因。通过在YES培养基上的单因素实验,利用Real-Time PCR技术,验证基因An15g07920与产OTA的关系。结果表明:该基因与OTA合成呈正相关,当pH 7.0,温度25℃时,An15g07920基因表达量最高,随着温度的升高,该基因表达量下降。菌体生长前期基因表达量高,随着培养时间的延长,基因表达量逐渐下降。为了对建立的HPLC及分子鉴定方法进行应用评价,将产毒菌株接种到4种食物中,2 d后利用HPLC进行检测。结果表明4种食物中均含有OTA,且水果中OTA含量明显高于干果。对PCR方法进行灵敏度评估,将不同数量的产毒菌株孢子接种到样品中,从中提取孢子基因组进行验证,查看该方法的实际灵敏度。实验表明,当样品中孢子含量超过2.0×106个/g时,该分子鉴定方法能够对样品被有毒菌株污染做出检测。