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中医认为白色念珠菌感染疾病是由于湿热在体内蕴结,加上外受毒邪所致。日久湿热之邪必然要伤阴,出现阴伤、湿热阻滞的虚实夹杂的症候。中药复方因含多种有效成分,具有多方位的综合效用,抗菌谱广,且高效、低毒诸多优点,适合长期用于预防和应用,日渐受到学者们的重视。三黄汤出自《千金翼》卷十五,是由黄连、黄芩和大黄三味中药组成,主治三焦壅热,烦躁谵语,大便秘结等症状。复方三黄汤是临床用方,实验室前期工作根据清燥湿热的三黄汤为基础方,减去大黄加黄柏,得到抗白色念珠菌效果更佳的复方三黄汤。本课题进一步研究复方三黄汤中有效组分有抑制白色念珠菌的作用,并且进一步研究有效组分抑制白色念珠菌的作用机制。本文首先对复方三黄汤以最小抑菌浓度为指标进行导向分离。复方三黄汤通过乙醇回流提取,减压浓缩得浸膏。用水复溶后通过乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯层。乙酸乙酯层通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯为洗脱系统)共得到10个流份,其中石油醚:乙酸乙酯=3:1层(BWM-7)的抗菌活性最好,为0.03125 mg/mL。通过硅胶柱色谱对BWM-7进行分离纯化,共得到3个单体化合物,经过理化性质和波谱学手段对化学结构进行鉴定,分别为单体化合物X,单体化合物Y,单体化合物Z。其次,考察BWM-7对白色念珠菌生物膜的影响,结果表明可以有效的抑制白色念珠菌生物膜的形成。絮凝试验和细胞表面疏水性实验表明,BWM-7能够降低白色念珠菌的絮凝能力和细胞表面疏水性,抑制白色念珠菌生物膜形成降低致病性。BWM-7作用白色念珠菌1.5 h后,白色念珠菌存活率就出现了大幅度的降低,而且比氟康唑作用的白色念珠菌菌存活率更低,说明BWM-7对白色念珠菌在体外杀菌起效时间快,并且能在一定时间内抑制白色念珠菌的生长。通过XTT、MTT、结晶紫法、扫描电镜、荧光染料和硅胶模型方法检测BWM-7对白色念珠菌生物膜的影响,2 mg/mL的BWM-7能够显著性的抑制白色念珠菌生物膜的形成。用实时定量PCR检测BWM-7对白色念珠局生物膜基因的影响,结果表明BWM-7可以显著性降低白色念珠菌生物膜PLB2、LIP9、SAP5、Ndt80、EFG1、BCR1基因。最后,研究在细胞水平BWM-7抑制白色念珠菌的机制。实验表明,与BWM-7未预处理组相比,6.25 mg/mL和12.5 mg/mL BWM-7预处理巨噬细胞24 h后,白色念珠菌刺激巨噬细胞3 h后,瑞士-吉姆萨染色结果显示巨噬细胞吞噬酵母型白色念珠菌数目达17%,表明黄BWM-7可以增加巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬作用。Western blot检测巨噬细胞中NF-κB,iNOS蛋白的表达情况,结果表明,白色念珠菌刺激巨噬细胞后,巨噬细胞中各蛋白表达量显著性升高,细胞中炎症反应增加,而BWM-7预处理组,巨噬细胞中各蛋白表达量与未处理相比显著性下降。ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中细胞因子IL-2、IL-12、IL-6、TNF-α的表达,结果表明,白色念珠菌刺激巨噬细胞后,巨噬细胞中各细胞因子表达量显著性升高,细胞中炎症反应增加,而BWM-7预处理组,巨噬细胞中各蛋白表达量与未处理相比显著性下降,接近细胞正常状态时细胞因子的表达量。本实验得出,通过对复方三黄汤中抗菌有效成分的分离纯化,得到BWM-7的抗菌效果最佳。并研究了其体外抑制白色念珠菌的作用,及细胞水平,白色念珠菌刺激巨噬细胞后BWM-7能够促进巨噬细胞的吞噬作用,并且能够降低白色念珠菌感染巨噬细胞后引起的炎症反应。说明BWM-7不但有杀菌作用还能提高巨噬细胞的功能,降低巨噬细胞的炎症反应。