低氧诱导因子-1a受体的小干扰RNA对人脊髓星形胶质瘤细胞凋亡的影响

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目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)受体的小干扰RNA对人星形胶质瘤细胞(U251)凋亡的影响,小干扰RNA对HIF-1α的调控作用;探讨肿瘤细胞凋亡的分子机制及调控。 方法 构建靶向低氧诱导因子-1α(HIF-1α)受体的小干扰RNA(si RNA)真核表达载体pSUPER EGFP1。培养成熟的U251细胞株随机分成:①、载体(载体中转染HIF-1α基因)缺氧组(U251在1%氧,无糖和血清的培养基中分别培养12h、24h和48h):②、载体常氧组(U251在常氧,无糖和血清的培养基中分别培养12h、24h和48h);③、空载体(载体中未转染HIF-1α基因)缺氧组(U251在1%氧,无糖和血清的培养基中分别培养12h、24h和48h);④、空载体常氧组(U251在常氧,无糖和血清的培养基中分别培养12h、24h和48h);⑤、对照缺氧组(U251在1%氧,无糖和血清的培养基中分别培养12h、24h和48h);⑥、对照常氧组(U251在常氧,无糖和血清的培养基中分别培养12h、24h和48h)。每一个样品采用real time PCR测定HIF-1αmRNA表达水平;Western Blot和免疫组织化学测定HIF-1α蛋白表达水平;光镜和电镜分别观察细胞、细胞线粒体和足突改变;荧光显微镜观察细胞荧光;
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