端粒酶是一种核蛋白逆转录酶,以其RNA作为模板、蛋白质亚基作为逆转录酶,延长端粒DNA,维持端粒长度的稳定,进而使细胞永生化。端粒酶活性在85%以上的恶性肿瘤中上调,与大多数人类癌症的发展高度相关,是一种广谱性肿瘤标志物。因此,可靠检测端粒酶活性对癌症的诊断与治疗具有重要意义。迄今为止,研究者们已建立众多检测端粒酶活性的方法,解决了端粒酶活性高灵敏及原位检测的问题。然而,端粒酶活性即时检测的研究很欠缺。即时检测技术是指以便携式设备为检测工具,在采样现场快速检测分析的技术。即时检测具有仪器小型、耗样量少、操作简单、检测周期短、检测结果即时等优点,在临床检验、食品安全监控、个人健康管理等领域都有极大需求。发展疾病标志物的即时检测法对于疾病的早期筛查和医疗条件较差地区的疾病诊断是极其重要的。基于此,本论文提出了以手持式发光检测仪为检测工具,构建端粒酶活性的化学发光即时检测法。主要研究内容为以下两方面:一、灵敏检测端粒酶活性化学发光即时检测法研究以手持式发光检测仪为检测工具,基于辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺/过氧化氢/对碘苯酚（luminol/H2O2/PIP）化学发光反应,首次建立了端粒酶活性化学发光法即时检测法。通过链霉亲和素-生物素特异性作用将生物素标记的端粒DNA引物（TS）修饰到链霉亲和素功能化的磁珠表面。端粒酶延长TS,形成含有多个TTAGGG重复单元的延长产物TEP。每条TEP长链可以与多条短的辣根过氧化物酶标记的互补DNA链（HRP-cDNA）杂交,从而使得大量HRP富集在磁珠表面。磁分离洗涤后,磁珠上特异性富集的HRP催化luminol/H2O2/PIP发生化学发光反应。采用手持式发光检测仪测定化学发光强度发现,在10-1000个HeLa细胞范围内,化学发光强度与细胞数目的对数值呈良好线性关系。将端粒酶的自放大作用与化学发光的高灵敏度相结合,检出限低至9个HeLa细胞。此外,该方法可以区分不同细胞中端粒酶活性差异,并可在血清中测定端粒酶活性。基于手持式发光检测仪和HRP催化的luminol/H2O2/PIP化学发光体系,可实现更稳定、价廉的即时检测。二、无需标记检测端粒酶活性化学发光即时检测法研究以手持式发光检测仪为检测工具,建立了简单、均相且无需标记检测端粒酶活性的化学发光即时检测法。端粒酶将多个TTAGGG重复单元逐渐添加至端粒DNA引物（TS）的末端,形成的长链DNA可以与多条短的互补DNA（cDNA）杂交。该杂交双链与双链嵌插染料SYBR Green Ⅰ、亚铁氰化钾[K4Fe（CN）6]混合后,在LED灯照射下产生单线态氧,将亚铁氰化钾氧化为铁氰化钾[K3Fe（CN）6]。铁氰化钾与鲁米诺反应产生很强的化学发光。在100-2000个HeLa细胞的范围内,化学发光强度与细胞数目的对数值呈良好线性关系,检出限为98个HeLa细胞。该工作首次将鲁米诺/铁氰化钾化学发光体系用于化学发光即时检测,建立了一种价廉、快速、灵敏的端粒酶活性化学发光即时检测法。