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目的:探讨线粒体DNA拷贝数异常及4977bp片断缺失在喉癌发病机制中的作用
方法:选取32例喉鳞状细胞癌标本,显微切割获取癌和癌周组织,提取总DNA(包括包括核DNA和线粒体DNA)。以ND1和β-actin为目的基因,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增。β-actin/ND1 DNA用作比较mtDNA相对拷贝数,并对不同TNM分期和分化程度喉鳞状细胞癌的mtDNA拷贝数进行比较分析。利用mitin和mitout两对引物进行PCR扩增,对喉癌周组织和癌组织△mtDNA4977bp缺失进行比较分析。
结果:LSCC(Ⅰ和Ⅱ期)癌周、癌组织平均(β-actin/ND1DNA)比分别为0.269和0.274,(Ⅲ和Ⅳ期)癌周、癌组织平均(β-actin/ND1DNA)比为0.168和0.157。癌周组织低、中、高分化的平均(β-actin/ND1DNA)比分别为0.184、0.237、0.239;癌组织分别为0.175、0.201、0.226。在32例喉癌△4977bp mtDNA的发生率为12.5%(4/32),癌组织为6.25%(2/32),癌周组织为6.25%(2/32)。
结论:喉鳞状细胞癌(Ⅲ和Ⅳ期)癌组织的线粒体DNA拷贝数显著高于Ⅰ和Ⅱ期,喉鳞状细胞癌(Ⅰ和Ⅱ期)癌组织的线粒体DNA拷贝数显著高于癌周组织,Ⅲ、Ⅳ期癌组织的线粒体DNA拷贝数与癌周组织无显著性差异。中、低分化的喉鳞状细胞癌癌组织线粒体DNA拷贝数显著高于癌周组织,高分化两者无显著性差异。mtDNA拷贝数的变化在肿瘤的发病机制中可能是一个早期事件。喉癌组织和癌周组织的△mtDNA4977bp缺失的发生率无差异。