蓝莓渣多酚分离纯化及抗氧化活性研究

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本文研究了蓝莓渣多酚的提取工艺,确定了蓝莓渣多酚的最优提取工艺参数;研究了大孔吸附树脂对蓝莓渣多酚的最佳纯化条件,使蓝莓渣多酚的纯度大大提高;研究了聚酰胺层析柱对蓝莓渣多酚的初步分离,并利用HPLC-DAD-MS技术对蓝莓渣多酚的具体组成进行了分析;评价了蓝莓渣多酚粗提物和纯化物的体外抗氧化活性。主要结果如下:通过单因素试验研究了乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度、振荡频率、pH、提取次数等因素对蓝莓渣多酚提取率的影响,使用Design Expert7.0软件设计,通过Plackett Burman试验及响应曲面试验分析确定了乙醇提取蓝莓渣多酚的最佳工艺条件为:乙醇浓度60%,液料比20(mL/g),提取温度80℃,pH2。在此条件下,蓝莓渣多酚提取率为97.01%。对8种不同型号的大孔树脂进行筛选,AB-8树脂的吸附量为24.48mg/g,解析率为95.49%,并且达到吸附平衡与解析平衡的时间较短,较适合蓝莓渣多酚的纯化。最佳吸附条件为上样溶液多酚浓度2.6mg/mL、pH2、上样速率2mL/min;最佳洗脱条件为乙醇体积分数60%、洗脱速率2mL/min,洗脱体积80mL,在此条件下,蓝莓果渣多酚纯度由11.05%提高到59.29%。采用聚酰胺层析柱对蓝莓渣纯化多酚进行初步分离,结合蓝莓渣的HPLC-DAD-MS结果与相关文献报道,鉴定蓝莓果渣中含有16种多酚,分别为:飞燕草色素-3-半乳糖苷,B型原花青素二聚体,飞燕草色素3-葡萄糖苷,飞燕草色素3-阿拉伯糖苷,矢车菊色素3-半乳糖苷,牵牛花色素3-半乳糖苷,牵牛花色素3-葡萄糖苷,牵牛花色素3-阿拉伯糖苷,A型原花青素二聚体,锦葵色素3-半乳糖苷,锦葵色素3-葡萄糖苷,芦丁,槲皮素-葡萄糖醛酸,槲皮素和两种未知多酚。通过八种方法比较了蓝莓渣粗提多酚(BPEP).蓝莓渣纯化多酚(BPPP)及芦丁的体外抗氧化活性。在ABTS+自由基清除能力、DPPH·自由基清除能力、亚硝酸盐清除能力、ORAC值方面,BPEP与BPPP均高于Rutin或者与其相当。而三种样品FRAP值和还原力顺序为BPPP>Rutin>BPEP,·OH自由基清除能力和超氧阴离子自由基清除能力顺序为Rutin大于BPPP和BPEP。
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