胶原蛋白是广泛存在于低等脊椎动物和哺乳动物机体中的一类蛋白质,也是哺乳动物体内含量最多的一类蛋白质,约占动物体蛋白质总量的25%-30%。胶原蛋白有着很好的生物活性,可做成医学材料及美容制品。但是现今人们通过酸法、碱法和酶法从动物皮毛和结缔组织中获取的胶原蛋白往往存在活性低,有病毒隐患,且安全性差,有排异反应等缺陷,限制了它的临床应用。采用现代生物技术生产的胶原蛋白可以克服以上不足,例如本文的前期工作就是基于蛋白质工程和基因工程技术设计、合成人源胶原蛋白基因不同序列,再将其转入宿主中表达得到类似于人胶原蛋白的目的蛋白。本文在本实验室成功构建的表达类人胶原蛋白的重组巴斯德毕赤酵母GS115/pPIC9KG6基础上,对其表达外源蛋白的发酵、诱导条件进行了研究。从诱导温度、pH值、甲醇添加量、诱导期选择、转速、发酵时间、初始诱导菌浓等方面对构建的基因工程菌——巴氏毕赤酵母甲醇利用快型的摇瓶发酵条件进行了优化,为下一步高密度发酵表达类人胶原蛋白的研究提供参考数据。经过系统的单因素实验和正交试验分析研究表明,摇瓶发酵条件下,诱导取样时间为84h,诱导温度为30℃,甲醇添加量为2%/24h,发酵初始pH值为6.5,初始菌浓为2OD₆₀₀/mL时,类人胶原蛋白的表达量为98.06mg/L。另外,初步探索了检测发酵液中羟脯氨酸含量的快速、简便的分析方法,得到了SDS-PAGE凝胶成像系统分析法和羟脯氨酸定量法其两种不同检测方法下同一样品中类人胶原蛋白含量数据之间的比例关系。