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研究目标:明确IGF2BP1在人皮肤鳞状细胞癌(SCC)细胞中的表达及生物学功能,为皮肤SCC的分子靶向治疗提供有益的探索研究方法和内容:●实时定量PCR(qRT-PCR)方法、蛋白免疫印迹(Western blotting)方法观察皮肤SCC细胞和组织内IGF2BP1 mRNA和蛋白的表达;●运用转染慢病毒包裹shRNA(短发夹RNA)稳定敲减皮肤SCC细胞内IGF2BP1的表达;●运用CRISPR/Cas9基因编辑方法敲除皮肤SCC细胞内IGF2BP1的表达;● CCK-8比色法、细胞集落试验(Clonogenicity assay)、BrdU酶联免疫吸附测定(ELISA)检测敲减或敲除IGF2BP1后对皮肤SCC细胞存活及增殖的影响;●在A431皮肤SCC细胞中,通过转染方法外源性过表达IGF2BP1,观察处理后癌细胞存活和增殖的变化;●实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测皮肤SCC细胞内长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)THOR(“Lnc-THOR”)表达;●在体外培养的A431细胞中,通过siRNA方法靶向敲减Lnc-THOR,观察其对皮肤SCC细胞存活及增殖的影响;●建立严重联合免疫缺陷(SCID)鼠荷A431瘤模型,观察敲减或敲除IGF2BP1后对A431细胞在体生长的影响。研究结果:●IGF2BP1蛋白和mRNA在人皮肤SCC细胞中高表达;●IGF2BP1蛋白和mRNA在人皮肤SCC组织中高表达;●shRNA稳定敲减IGF2BP1显著抑制人皮肤SCC细胞存活和增殖;●CRISPR/Cas9基因编辑方法敲除IGF2BP1显著抑制人皮肤SCC细胞存活和增殖;●人皮肤SCC细胞中,敲减或敲除IGF2BP1显著下调IGF2,CD44,Glil和Myc mRNA的表达;●外源性过表达IGF2BP1促进A431细胞存活和增殖;● Lnc-THOR在人皮肤SCC细胞高表达;●siRNA方法靶向敲减Lnc-THOR显著抑制IGF2BP1功能和A431细胞存活和增殖;●敲减或敲除IGF2BP1后显著抑制A431细胞的在体生长;研究结论:IGF2BP1在皮肤SCC细胞中呈高表达,是皮肤SCC细胞细胞存活和增殖所必需的。IGF2BP1可能是皮肤SCC的新的关键分子靶向蛋白。