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目的:癫痫是一组由于神经元异常放电而导致的神经系统疾病,癫痫外科的治疗选择主要在于定性及明确的定位诊断,以及预测和评估癫痫外科治疗的预后及效果,而目前,难治性癫痫仍缺少较为稳定且特异的生物标志物,其中与癫痫手术术后效果客观化评估相关的血清生物标志物属于其中之一,目前仍然欠缺,因此,本研究的目的是以药物难治性颞叶癫痫为出发点,首先整理分析经过外科手术治疗的颞叶癫痫的预后,以及患者术前脑电图形式及MRI表现如何影响手术预后,之后选择部分治愈的颞叶癫痫病例,利用蛋白质组学的技术,以手术病例血清样本为实验材料,并进行手术前后的自身对照,筛选出能够用于评估手术治疗效果,即术后癫痫状态评估的血清标志物,并进一步进行验证,进而选择适宜的标志物进行其在不同入组病人手术前后血清浓度的范围定量,使其具有潜在的临床应用价值。方法:选择在2010年10月至2014年10月间,中国医科大学附属盛京医院功能神经外科治疗并符合颞叶癫痫诊断的病例共129例,其中外科治疗115例,所有病例术后按照ILAE或Engel分级的标准进行评估,跟踪随访1-4年,经外科治疗的病例按照术前脑电图的间歇期放电形式及MRI表现进行分类,分析不同形式的间歇期放电及MRI表现在癫痫发作完全控制率上的差异,随机选择术式为前颞叶及海马杏仁核切除术,并在术后符合ILAE或Engel分级I级(癫痫发作完全控制)标准的病例29例,这些病例均在术前及术后不同随访时间点(术后3个月,6个月,1年,18个月,2年)采集静脉血清样本,将每个病例按照手术前后进行自身对照,病例按照“1-29”进行编号。首先,随机筛选9组病例,编号为“1-9”进行蛋白质组学筛选实验,9组病例进行手术前后自身对照,通过高效液相色谱及质谱的方法,筛选出于手术前后变化明显的差异蛋白,并整理出每个蛋白中变化较为明显的肽段,之后,通过扩大样本的方法(扩展病例数至24例,编号为“1-9”,“15-24”),均采用自身前后对照的方式,对上面筛选出的蛋白肽段进行PRM验证,同时选择编号为“10-14”的五组病例,按照术前,术后3个月,术后1年的节点绘制上面所筛选出的蛋白肽段随时间的变化曲线,其后选择变化最为明显,检出阳性率最高,且具有未来临床应用前景的HBA蛋白肽段“VGAHAGEYGAEALER”,进行体外合成,并绘制质谱强度-血清浓度标准曲线,检测验证实验中24例病例中该肽段在手术前后的浓度,并计算手术前后差异,绘制正态分布曲线,得出初步参考浓度区间,最后,进行自发性颞叶癫痫SD大鼠动物模型,通过脑脊液微透析的方法,将海马区透析出的脑脊液进行蛋白质组学的筛查,进一步检证通过人血清样本所筛选出蛋白是否存在于海马区并具有分泌能力。结果:经过外科手术治疗的115例颞叶癫痫病例,按照4年随访期,术后癫痫发作完全控制率分别为90.2%、79.8%、75.2%和72.5%,单侧前头部放电和双侧放电在术后癫痫发作完全控制率上的差异有统计学意义(P<0.001),对于MRI为阳性的病例,无论间歇脑电图为何种形式,术后整体预后相对较好,而对于MRI为阴性的病例,间歇脑电图放电局限在单侧前头部的,术后整体预后相对较好;通过筛选实验的9组病例,筛选出了10种在手术前后变化明显,且具有统计学意义(P<0.05)的蛋白,Hemoglobin subunit alpha(HBA,P=0.0080)、Hemoglobin subunit beta(HBB,P=0.0417)、Peroxiredoxin-2(PRDX2,P=0.0052)、Flavin reductase(BLVRB,P=0.0108)、Aldolase A(ALDOA,P=0.0266)、Carbonic anhydrase(CA1,P=0.0042)、Catalase(CAT,P=0.0036)、Biophosphoglycerate mutase(BPGM,P=0.0166)、14-3-3 protein epsilon(YWHAE,P=0.0178)和Heat shock cognate 71kDa protein(HSPA8,P=0.0408),选择上述蛋白中的检出率较高的肽段设计PRM检索策略,进行进一步的扩大样本量(n=24)的病例验证后,上述蛋白的变化结果为HBA(P=0.008,下降阳性率83.33%),HBB(P=0.005,下降阳性率87.50%),PRDX2(P=0.015,下降阳性率75.00%),BLVRB(P=0.02,下降阳性率87.50%),ALDOA(P=0.02,下降阳性率70.83%),CA1(P=0.02,下降阳性率87.50%),CAT(P=0.006,下降阳性率87.50%),BPGM(P=0.03,下降阳性率84.21%),YWHAE(P=0.02,下降阳性率75.00%),HSPA8(P=0.02,下降阳性率87.50%),五组病例绘制上述肽段动态曲线可见,变化明显的蛋白肽段在术后3个月时最为明显,而在术后1年时的变化与术后3个月之间无明显差异,说明,这些蛋白的变化在术后早期即已出现。进一步,我们考虑这些蛋白是以肽段的形式作为标志物被我们所检测到的,故通过人工合成纯肽“VGAHAGEYGAEALER”标准品并进行了其在上述24例验证实验病例中的浓度定量范围测定,术前平均浓度在1*10~3-1*10~4pmol/ml之间,术后平均浓度在1*10~2-1*10~3pmol/ml,两者之间的差异具有明显的统计学意义(P<0.001)。通过自发性颞叶癫痫动物模型脑脊液微透析实验,癫痫鼠与正常鼠海马区透析出的脑脊液蛋白质组学筛查对比可见通过上述人血清样本筛选出的10种蛋白中的9种出现差异,分别为HBA、HBB、PRDX2、BLVRB、ALDOA、CA1、BPGM、YWHAE、HSPA8。可见这些蛋白一方面在癫痫发作起始区有所分布,另一方面其具有分泌性质。此外,本研究又进行了2名额叶癫痫,1名皮层发育不良继发癫痫,1名颅内占位继发癫痫的自身手术前后对照,以及2名原因待查癫痫儿童和2名正常儿童对照的血清蛋白质组学筛查实验,通过颞叶癫痫筛选出的上述10种手术前后变化明显的差异蛋白在这些病例中未发现类似的现象,提示,这些蛋白可能具有一定的定位诊断潜力。结论:外科手术是颞叶癫痫治疗的有效方法,术前脑电图间歇放电局限在单侧前头部的术后预后较好,MRI异常的病例,无论术前间歇期的放电形式,术后预后均较好;在难治性颞叶癫痫手术前后发现了10种显著变化的差异蛋白,分别为HBA、HBB、PRDX2、BLVRB、ALDOA、CA1、CAT、BPGM、YWHAE和HSPA8。可以作为难治性颞叶癫痫术后癫痫状态及预后评估生物标志物;上述10种蛋白均以肽段形式存在于血清中。