丝氨酸蛋白酶是一类以重要的蛋白水解酶，它是以丝氨酸为活性中心的，在生物有机体中起着十分重要的生理作用，它们通过激活或者抑制蛋白酶原而起到调节因子作用。本文研究的蛋白酶K属丝氨酸蛋白酶类，它是林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）产生的一类主要蛋白酶。因能合成该种蛋白酶的微生物能在以角蛋白（Kerantin）为唯一碳氮源的环境中生长，故将其称作蛋白酶K。蛋白酶K具有极高的酶活性和广泛的底物特异性，能优先分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸C末端邻接的酯键和肽键，常被用于降解蛋白生产短肽。它具有丝氨酸蛋白酶类所具有的典型催化三联体Asp39-His69-Ser224特征并且活性中心周围有两个Ca²⁺结合位点以增加其稳定性，使其在更广泛的条件下保持较高的酶活力。蛋白酶K能将蛋白失活或降解，利用其这个特性，在核酸纯化、丝绸、医药、食品和酿造等领域蛋白酶K都有着重要的应用。因此，研究和探索蛋白酶K的性质，功能以及应用，对其发展现状进行展望是进一步开发利用这种高效酶的前提。本文主要对蛋白酶K进行优化重组，重点对重组蛋白酶K的培养条件优化，其酶学性质的研究。本实验是对原始蛋白酶K基因进行密码子优化，然后进行全基因合成。将合成的蛋白酶K基因连接到载体pPIC9K上，组成pPIC9K-proteinase k重组质粒，然后将线性化的pPIC9K-proteinase k重组质粒导入GS115感受态细胞中，筛选出带多拷贝目的基因的菌株，作为实验菌株，称为GS11-pPIC9K-proteinase k。本文还研究了温度、起始PH、诱导时间和诱导时机四个方面对重组蛋白酶K菌株生长和蛋白表达的影响，得到重组蛋白酶K的最优培养条件为：重组蛋白酶K经过BMGY培养基中培养到OD600到达2.0的时候将其离心，菌体沉淀重悬于BMMY培养基中培养72，隔24h添加0.5%（v/v）甲醇。文章还对重组蛋白酶K进行了镍柱分离纯化，最后的纯化产品生物活性为12.94U/mg，纯度为93.3%,总回收率为45.4%,蛋白酶k的纯度从69.4%增加到91.6%。通过纯化,1L发酵液中产生105毫克蛋白酶k，酶活为1100U。蛋白酶k上清酶活回收率为68.9%。并且研究了重组蛋白酶K的酶学性质，实验证明其有很好的温度耐受性和一定的酸碱耐受性，这些结论都证明重组蛋白酶K是一个可以广泛被应用的蛋白酶。