[目的]本课题所选药物为胡黄连苷Ⅱ,是从传统中草药植物中提取的小分子化合物,近年来的一些研究结果已经证明了其具有明显的抗癌生物活性。本课题拟通过体外实验的方式,探索胡黄连苷Ⅱ对人结直肠癌SW480、SW620细胞系的抑制作用及其可能的作用机制。[方法]1.通过查阅文献资料挑选出两株人结直肠癌SW480、SW620细胞作为本课题的研究对象。体外培养SW480、SW620两株细胞,利用CCK-8法检测两株细胞的标准生长曲线,为下一步筛选药物确定适宜的铺板细胞数量;2.利用 CCK-8 法检测浓度分别为 1μM、5μM、10μM、25μM、50μM、100μM的胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、绞股蓝皂苷A、龙胆苦苷、天麻素处理SW480、SW620细胞48h后的细胞增殖情况,以浓度为2μM的5-FU作为阳性药物对照,筛选出对人结直肠癌SW480、SW620细胞有明显抑制作用的药物,为后续实验确定目标药物;3.培养人结直肠癌细胞SW480、SW620,分别用浓度为1μM、5μM、10μM、15μM、20μM、25μM、30μM、40μM、50μM、100μM 的目标药物处理 24h、48h、72h,利用CCK-8法筛选出目标药物作用的最佳浓度和时间,计算出SW480、SW620细胞培养24h、48h、72h后目标药物的IC50,为下一步实验确定目标药物浓度以及目标药物作用时间;4.根据计算的IC50确定目标药物胡黄连苷Ⅱ干预组的低、中、高剂量。设置空白对照组（0μM）、胡黄连苷Ⅱ低剂量组（10μM）、胡黄连苷Ⅱ中剂量组（25μM）、胡黄连苷Ⅱ高剂量组（100μM）,分别采用细胞平板克隆法、Edu细胞增殖检测法观察目标药物对人结直肠癌SW480、SW620细胞增殖能力的影响;5.人结直肠癌SW480、SW620细胞分别设置空白对照组（0 μM）、胡黄连苷Ⅱ低剂量组（10μM）、胡黄连苷Ⅱ中剂量组（25μM）、胡黄连苷Ⅱ高剂量组（100μM）,分别利用划痕实验、Transwell实验观察目标药物对人结直肠癌SW480、SW620细胞迁移与侵袭能力的影响;6.两株人结直肠癌细胞分别设置空白对照组（0μM）、低剂量组（10μM）、中剂量组（25μM）、高剂量组（100μM）,通过Western Bolt实验检测目标药物处理人结直肠癌SW480、SW620细胞48h后蛋白水平的改变,观察各组EMT标志性蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB2以及Notch信号通路相关蛋白 Notch1、Cleaved Notch1、RBPSUH、HES1 表达水平的变化。[结果]1.根据所测标准生长曲线,两株人结直肠癌细胞10000个/孔培养48h时测得的OD值都在最佳OD值范围1.0-1.5之间,故后续CCK-8实验都以细胞的标准曲线为基础选择每孔细胞数;2.CCK-8实验结果显示Pic Ⅰ、Gas、Gen、Gyp A四种单成分中药对人结直肠肿瘤SW480、SW620细胞作用48h后的生长抑制率没有明显差异（P>0.05）;用不同浓度Pic Ⅱ处理两株细胞,各个胡黄连苷Ⅱ的浓度组之间生长抑制率均有显著差异（P<0.0001）,PicⅡ浓度为25 μM时SW480细胞的生长抑制率为48.98±0.4012%,SW620 细胞的生长抑制率为 54.69±0.9935%;3.CCK-8实验结果显示Pic Ⅱ对SW480、SW620细胞增殖的抑制作用随药物作用时间和浓度的增加而增强,呈现出时间-剂量-效应关系;根据拟合曲线计算得出 48h的IC50（SW480）=24.35μM、IC50（SW620）=25.06μM;4.细胞平板克隆实验结果,显示SW480、SW620细胞经过Pic Ⅱ处理后,其细胞克隆形成数量、细胞克隆形成体积有明显的差异,并且抑制效果呈浓度依赖性;5.Edu细胞增殖实验显示Pic Ⅱ对SW480、SW620细胞增殖有明显抑制作用,Edu阳性率随Pic Ⅱ浓度升高而降低,并且抑制效果呈浓度依赖性;6.划痕实验结果显示Pic Ⅱ对SW480、SW620细胞的迁移能力有明显抑制作用,Pic Ⅱ浓度越高相对迁移率越小;Transwell实验结果显示Pic Ⅱ对SW480、SW620细胞的迁移、侵袭能力有明显抑制作用,Pic Ⅱ浓度越高穿过聚碳酸酯膜的细胞越少;7.WB实验结果显示,PicⅡ处理后的细胞E-cadherin蛋白表达量增加,N-cadherin、Vimentin、ZEB2蛋白量减少,提示Pic Ⅱ抑制了结直肠癌SW480、SW620细胞的EMT过程,造成了 EMT相关标志蛋白表达水平发生了变化;Notch信号通路相关蛋白Notch1、Cleaved Notch1的表达水平显著降低,同时其下游的转录因子RBPSUH及HES1的蛋白表达水平明显降低,提示Notch信号通路也受到了抑制,故我们推测Pic Ⅱ可能通过Notch信号通路来影响人结直肠癌细胞SW480、SW620细胞的EMT过程。[结论]1.一定浓度的胡黄连苷Ⅱ能显著地抑制人结直肠癌SW480、SW620细胞的增殖能力,胡黄连苷Ⅱ作用人结直肠癌SW480细胞48h的IC50=24.35μμM;SW620细胞 48h 的 IC50=25.06μM;2.一定浓度的胡黄连苷Ⅱ能显著地抑制人结直肠癌SW480、SW620细胞迁移与侵袭能力以及EMT过程;3.胡黄连苷Ⅱ可能通过抑制Notch信号通路影响人结直肠癌SW480、SW620细胞EMT和转移的生物学过程。