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目的:通过肠道病毒71型(human enterovirus71,EV71)对恶性胶质瘤细胞M059J细胞(DNA-PK缺陷型)和M059K细胞(DNA-PK野生型)的感染性研究,阐明DNA依赖蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)对EV71感染神经的影响。
方法:通过空斑形成试验来确定EV71的病毒毒力,分别感染M059J细胞和M059K细胞,观察病毒感染后的细胞病变效应,并利用real-time PCR方法检测感染细胞中EV71的RNA水平。利用RNAi技术,抑制M059K细胞中DNA-PK的表达,再观察细胞对EV71的感染性变化,同时检测感染细胞中EV71的RNA水平,进一步验证DNA-PK对EV71感染神经细胞的影响。
结果:空斑形成试验测定EV71毒株的毒力为1.8×107 pfu/mL。当感染复数为10时,病毒感染48h后M059J细胞出现明显的细胞病变(++~+++)而M059K细胞则没有明显的变化(-),此时M059J细胞中EV71的RNA含量约是M059K细胞中的12.5倍。利用RNAi技术抑制M059K细胞中的DNA-PK活性,real-timePCR法检测抑制率可达到85%。此细胞再感染EV71也出现明显的病变(++~+++),EV71的RNA表达量明显高于对照组。
结论:M059J和M059K细胞对EV71敏感性不同与DNA-PK表达相关,通过RNAi技术下调M059K细胞的DNA-PK基因表达,可增强EV71对靶细胞的感染。