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目的: 干扰素刺激基因20(ISG20)是一种由I型(IFNα/β)或II型干扰素(IFN-γ)诱导产生的蛋白质,具有特异的单链RNA或DNA的核酸外切酶活性,对于多种RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用。细胞内定位分析发现ISG20主要位于核小体和Cajal小体,鉴于核小体是rRNA和核糖体生成的主要场所,Cajal小体是snRNA和snoRNA生成的主要场所,进一步提示 ISG20可能通过其核酸外切酶作用影响snRNA和rRNA的成熟,从而抑制蛋白合成进而发挥抗病毒作用。因此,ISG20的表达差异及核酸外切酶活性对于不同病毒感染性疾病的发病、α-干扰素治疗的疗效及预后可能具有重要影响。本研究从临床试验和体外实验两方面观察ISG20在α-干扰素治疗应答组及无应答组慢乙肝患者肝脏组织标本中的表达差异与α-干扰素疗效的相关性,并对其所参与的α-干扰素抗乙肝病毒机制进行初步研究。 方法: 本研究首先选取接受α-干扰素治疗的慢乙肝患者24人,给予聚乙二醇干扰素α-2a(Peginterferon-alpha-2a,派罗欣)抗乙肝病毒治疗48周,共随访72周,依随访结果分为治疗应答组及无应答组。对其治疗前肝穿标本行免疫组化检测观察ISG20蛋白在各组肝脏组织中的差异表达并以QRT-PCR加以验证。在体外实验中,我们选择在HBV-DNA全基因重组质粒转染肝癌细胞株HepG2形成的HepG2.2.15细胞系上进行研究,后者是体外研究乙肝病毒对肝细胞影响的经典模型。通过构建ISG20过表达慢病毒载体感染HepG2.2.15细胞,观察ISG20差异表达对乙肝病毒活性的影响,验证ISG20的抗乙肝病毒作用;通过点突变方法构建 ISG20去核酸外切酶活性的慢病毒载体,探讨 ISG20发挥抗乙肝病毒作用的机制是否依赖外切酶活性。分别用QRT-PCR及化学发光法检测细胞上清液中HBV-DNA及乙肝表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)评价其抗乙肝病毒活性。 结果: 免疫组化染色结果显示α-干扰素治疗应答组患者治疗前肝组织中ISG20蛋白较无应答组及对照组显著升高,且在应答组ISG20主要表现为细胞核高表达,明显区别于无应答组及对照组。在体外实验中,加入α-干扰素处理后,ISG20随着α-干扰素浓度的增加逐渐升高。野生型ISG20过表达组可以显著抑制乙肝病毒,这一结果与α-干扰素干预组的结果相似,并且ISG20过表达慢病毒与α-干扰素联合干预HepG2.2.15细胞后,其抑制乙肝病毒作用显著增强;而突变型ISG20的外切酶活性失活后,ISG20对乙肝病毒的抑制作用消失。此外,行免疫荧光检测,可见ISG20蛋白高表达于细胞核,这一结果与肝活检的免疫组化染色结果相一致,进一步证实ISG20抗乙肝病毒作用主要依赖于其核酸外切酶活性。 结论: 本研究发现在α-干扰素治疗慢乙肝应答组及无应答组中,ISG20蛋白的表达水平及细胞内分布存在显著差异,提示肝组织内ISG20蛋白的差异表达与α-干扰素治疗慢乙肝的疗效相关。体外实验证实,ISG20作为干扰素刺激基因,可由α-干扰素诱导产生,ISG20的表达差异与α-干扰素抗乙肝病毒作用差异存在显著的相关性,并发现其抗乙肝病毒作用主要依赖于其核酸外切酶活性。