谷氨酰胺缓解断奶犊牛断奶应激及其机理研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 13次 | 上传用户:dlzshy
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本论文通过在断奶犊牛日粮中添加过瘤胃谷氨酰胺(Gin),来探讨Gin对断奶犊牛生长性能、免疫能力、抗氧化能力、小肠肠道结构、肝细胞和肠道上皮细胞自噬的影响,从细胞水平来研究Gin缓解犊牛断奶应激的作用机理。试验一Gin对断奶前后犊牛生长性能和生理代谢指标的影响选择75头出生日期、体重相近的公犊牛进行饲喂试验,将犊牛随机分为5组:对照组饲喂常规日粮,4个处理组分别添加日采食量1%、2%、3%和4%的过瘤胃Gin(谷氨酰胺含量为50%,过瘤胃率为75%,小肠释放率为87%),试验期为断奶前后2周,共4周时间,研究Gin对断奶前后犊牛生长性能和生理代谢指标的影响。结果表明:(1)断奶显著了降低犊牛的日增重(P<0.05),显著增加了犊牛的干物质采食量和饲料转化效率(P<0.05):添加不同水平的Gin极显著提高了断奶犊牛的日增重和干物质采食量(P<0.01),对饲料转化效率影响不显著(P>0.05)。添加1%Gin的处理组,犊牛的日增重、干物质采食量和饲料转化效率最高。(2)断奶能显著降低犊牛的血糖和Gin浓度,显著升高血液中尿素氮浓度(P<0.05):添加不同水平的Gin对断奶犊牛血糖浓度没有显著影响,但能显著增加血液中Gin和尿素氮浓度(P<0.05)。(3)断奶显著升高犊牛血液中生长激素浓度,降低血液中的胰岛素浓度(P<0.01);添加不同水平Gin对断奶犊牛血液中胰岛素和生长激素浓度没有显著性影响(P>0.05)。试验二Gin对断奶前后犊牛免疫和抗氧化能力的影响试验牛的选择和处理同试验一,结果表明:(1)犊牛断奶显著降低了外周血中CD3+T淋巴细胞比例和CD14+外周单核细胞比例(P<0.05)。饲喂不同水平的Gin增加了犊牛外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞比例、CD14+外周单核细胞比例和CD4+/CD8+的比值,但没有显著性差异(P>0.05)。(2)犊牛断奶显著降低了血液中IgG含量,对IgA和IgM含量没有显著影响。饲喂不同水平的Gin显著增加了犊牛血液中IgG和IgM含量(P<0.05),对血液中1gA含量没有显著性影响(P>0.05)。(3)断奶显著降低了犊牛血液中GSH-Px活性和T-AOC (P<0.05),对CAT、T-SOD.MDA活性没有显著影响(P>0.05)。饲喂不同水平的Gin极显著增加了犊牛血液中GSH-Px活性和T-AOC (P<0.01),饲喂不同水平的Gin增加了犊牛血液中CAT和T-SOD活性,但没有显著性差异(P>0.05)。试验三Gin对断奶犊牛小肠肠道结构的影响每组选出6头犊牛在70日龄屠宰,取十二指肠、空肠和回肠组织样品并在10%甲醛溶液中固定,病理切片检测十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度。结果表明:饲喂不同水平的Gin对断奶犊牛十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度比值没有显著影响(P>0.05)。饲喂不同水平Gin均增加了断奶犊牛空肠和回肠的绒毛高度和隐窝深度,但没有显著性差异(P>0.05)。在饲喂1%Gin时,断奶犊牛十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度,隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度比值最大。试验四Gin对断奶犊牛肝细胞和肠道上皮细胞自噬的影响每组选出6头犊牛在70日龄屠宰,取肝脏样品和空肠样品用western blotting检测肝细胞和肠道上皮细胞自噬情况。结果表明添加不同梯度的Gin均能提高犊牛肝细胞自噬体水平,其中添加3%的Gin能显著提高犊牛肝细胞细胞自噬体水平(P<0.05)。添加不同梯度的Gin均能显著降低犊牛肠道上皮细胞自噬体水平(P<0.05),其中添加1%的Gin对降低犊牛肠道上皮细胞自噬体水平的影响最显著。添加Gin可通过PI3K/Akt信号通路、S6K1信号通路和MAPK信号通路调节肝脏和肠道上皮细胞的自噬水平。
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