近年来,我国奶业发展迅速,但同时也有许多问题等待解决,奶牛围产期非酒精性脂肪肝病就是影响奶业发展的一个关键问题。患病奶牛容易出现乳房炎,酮病等,而且越高产奶牛患病的几率越大,这对于奶牛的机体健康和奶源质量的把控是个至关重要的因素。国内外研究表明,MEN1对与奶牛肝脏TG的积累有着至关重要的作用,MEN1基因是多发性内分泌肿瘤1型综合征(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1)的关键致病基因,其表达产物menin是细胞内重要的转录因子和结构性衔接蛋白,它能够参与细胞内多种生物学过程,调控细胞的代谢。1、为了探究MEN1和其编码的蛋白menin与非酒精性脂肪肝的关系,我们用Q-PCR技术检测了奶牛肝组织中MEN1的m RNA的表达量变化,在奶牛肝脏组织中我们发现患脂肪肝病的奶牛MEN1的m RNA表达量显著(P<0.05)升高。2、在已知PPARγ通路对脂肪肝发生有作用的前提下,我们检测了奶牛肝组织中,menin与PPARγ蛋白的互作情况和PPARγ下游脂肪肝相关基因的表达水平,结果显示,在奶牛肝组织中menin与PPARγ蛋白存在互作,且PPARγ通路中PPARγ(P<0.05)、FABP5(P<0.05)、CPT-1(P<0.05)显著上调,其他脂代谢基因也有上调趋势。3、为了验证Men1/menin对PPARγ通路下游基因的影响,我们在小鼠的肝细胞中构建Men1过表达、低表达模型,检测发现Men1过表达系统中Fabp3(P<0.01)、Fabp4(P<0.05)、Fabp5(P<0.05)、Cd36(P<0.05)的表达量显著下调。4、Men1低表达系统中Fabp3(P<0.05)、Fabp4(P<0.05)显著高表达,由此得出,Men1对PPARγ通路中Fabp3、Fabp4、Fabp5的表达有抑制作用。5、为探索menin经PPARγ调控FABP3、FABP4、FABP5基因表达的分子机制,我们在奶牛肝组织中Ch IP检测menin与FABP3、FABP4、FABP5的启动子是否结合,结果显示menin可以跟FABP3、FABP4、FABP5基因的启动子相结合,且根据结合量的差异,我们得到在患脂肪肝的奶牛肝组织中menin与之结合量降低。6、在正常小鼠的肝细胞中我们也检测到menin与Fabp3、Fabp4、Fabp5的启动子结合,在Men1过表达、低表达系统中发现,Men1过表达系统相比Men1低表达系统,menin与Fabp3、Fabp4、Fabp5的启动子结合量有上调趋势,这个结果说明menin可以通过与Fabp3、Fabp4、Fabp5基因启动子的结合量的变化来调控基因的转录水平。7、SIRT1作为机体重要的能量调控蛋白,同时也是重要的蛋白去乙酰化修饰酶,我们在奶牛肝组织和小鼠的肝细胞中Co IP检测到menin可以与SIRT1蛋白互作。为了探索menin通过与基因启动子结合来影响其转录的分子机制,我们在小鼠肝细胞中检测SIRT1与PPARγ下游基因Fabp4基因启动子的结合情况,发现SIRT1可以结合到menin与Fabp4启动子结合的同一片段。故我们猜测menin可能同时募集SIRT1和PPARγ进而协同靶向调控靶基因Fabp3、Fabp4、Fabp5的转录水平,以此来调控肝细胞中脂质的沉积。综上,我们发现MEN1基因编码的蛋白menin能够作为媒介蛋白通过与SIRT1蛋白协同作用,经PPARγ蛋白结合到FABP3、FABP4、FABP5基因的启动子上,进一步调控其基因的转录,从而影响肝细胞中脂质的代谢和奶牛肝脏脂肪肝的发生。该研究对于我们揭示围产期奶牛发生脂肪肝的分子病理机制具有开创性意义。同时,该研究为寻找治疗脂肪肝的药物靶标提供重要的理论指导。