研究背景：布鲁氏菌(Brucella,简称布氏菌)是一种革兰染色阴性的兼性细胞内寄生菌,是布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)的病原菌。布病是一种人兽共患病,在我国传染病防治法中属于乙类传染病。国际上,布病被归为B类传染病,在世界范围内都有流行,特别是2000年以后,布病疫情大幅度上升,给人民群众带来严重的健康损害和经济损失。目前,布鲁氏菌诊断的金标准是细菌分离培养,但是,布鲁氏菌培养难度大,周期长,且分离率低。最常用的血清学检测方法为虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)等,另外,由布鲁氏菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)包被的ELISA检测方法也逐步用于布病的诊断。但以上方法均无法区别试管凝集阳性血清是由于疫苗免疫还是自然感染。随着基因组学和蛋白质组学的发展,许多科研人员着眼于寻找布鲁氏菌疫苗株与野毒株的差异蛋白,并且进行了大量研究,但是目前为止,并没有找到一个能够从本质上区别疫苗株与野毒株的理想方法。人间布病的防控与动物布病的防控密不可分,而且研究数据显示人间布病的流行趋势与动物布病的流行趋势相符。在我国,牛和羊是布病主要的传染源,因此,控制牛和羊的布病疫情,有利于控制人间布病的流行,对减少国家和人民的经济损失具有重大意义。家畜布病预防的主要措施之一是疫苗的免疫接种。但是,由于传统的检测方法无法区别家畜的自然感染和免疫接种,如果将布病病畜误以为是免疫家畜,会保存传染源,对人和健康家畜带来极大威胁,反之,若将免疫家畜误以为是布病疫畜而淘汰宰杀,会对国家及个人经济带来巨大损失。特别是牛作为一种布病常见传染源,且其经济价值较高,所以,在目前疫情极其严重时期,更加需要一种方法能够区别出牛是自然感染还是免疫接种,并据此采取科学的处理措施,最大程度的避免不必要的经济损失,同时鉴别染疫动物保护人及其他家畜的健康。目前,我国最普遍应用于牛的疫苗是M5和S2,分别是羊种和猪种布鲁氏菌的弱毒活疫苗株,而自然感染的病牛,主要是牛种布鲁氏菌。随着布鲁氏菌全基因组测序技术的发展,已经有报道bp26基因存在于所有布鲁氏菌种中,而且种间相当保守,而omp31基因存在于除牛种之外的所有布鲁氏菌中,所以,将Bp26蛋白作为阳性对照蛋白,而Omp31蛋白作为种间差异标识蛋白,可有效地将牛种布鲁氏菌与羊种和猪种等其他布鲁氏菌种从血清学方法上区分开来,进而判断SAT阳性的牛是自然感染还是免疫接种。研究目的：本研究主要根据牛免疫接种疫苗株与自然感染的布鲁氏菌种的不同,通过区分布鲁氏菌的种间差异,间接的将疫苗接种与自然感染的牛区分开来。研究方法：原核表达系统得到布鲁氏菌的Omp31和Bp26两种蛋白,通过本实验室制备和采集的各种布鲁氏菌免疫血清以及牛种菌感染的牛血清进行western blotting(WB)试验,对这两种蛋白的检测和区别能力进行鉴定,最后得出结论,为布鲁氏菌阳性牛的处理决定提供实验室检测依据。研究结果：1、成功构建两种目的标识蛋白Omp31和Bp26重组原核表达质粒；2、成功的表达并纯化出了这两种目的标识蛋白；3、WB实验结果：M5疫苗免疫的血清6/7表现为Bp26和Omp31均反应阳性、S2疫苗免疫血清中5/6为两种蛋白反应阳性,自然感染的血清中9/10为Bp26反应阳性而Omp31反应阴性。研究结论：本研究成功表达出了两种布鲁氏菌标志蛋白Omp31和Bp26,并且用WB方法证明这两种蛋白具有区分牛种和非牛种布鲁氏菌免疫血清的能力,也可以区分牛的自然感染与疫苗免疫；Omp31和Bp26蛋白或可以鉴别其他微生物与布鲁氏菌SAT抗原的非特异凝集反应。