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背景胎盘是发育中的胎儿与妊娠母体间进行物质交换和免疫保护的重要器官。人类的胎盘可以通过提供营养、气体/废物交换、激素调节和来自母体免疫系统的免疫屏障来维持妊娠和支持胎儿的发育,其中胎盘滋养层细胞担负着这些功能中的绝大部分。胎盘滋养层细胞的侵润/迁移异常以及融合异常会引发妊娠相关疾病,如子痫前期(Pre-eclampsia,PE)等。目前,多数研究认为PE的进程有两个阶段:首先是胎盘灌注不足,进而演变为继发性的母体的多系统损害,而胎盘灌注不足已被公认为是引发PE的病因之一。PE是一种发生于妊娠期但是会累及多器官多系统的高血压综合征,是孕产妇和围产儿发病和死亡的主要原因之一,其中尤以重度子痫前期(Severe pre-eclampsia,sPE)为甚。PE以高血压和蛋白尿等症状为主要表现,全球每年大约有76000名妇女和50万名婴儿死于这种疾病。更早的预测和诊断PE并采取适当的治疗措施以提高孕产妇和围产儿的生存结局/质量是我们研究PE发病机制的目标。IGF2BP家族有多名成员,胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白2(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)是其中一员,该家族成员可以通过直接结合靶基因的mRNA起到稳定靶基因的作用,进而促进靶基因mRNA的蛋白翻译。据报道,IGF2BP2在肌细胞发生(Myogenesis)、胶质瘤干细胞(Glioblastoma stem cell)维持和癌症细胞的侵袭和迁移(主要为肝癌,Hepatocellular carcinoma)中都发挥重要作用。我们在先前的研究中发现,IGF2BP2能够介导在sPE病人血浆和胎盘中均异常高表达的miR-181a-5p对胎盘滋养层细胞侵润和迁移的调控作用:sPE胎盘中异常高表达的miR-181a-5p通过结合IGF2BP2 mRNA 3’-UTR 15-38 bp处的序列,导致IGF2BP2的mRNA降解和蛋白表达降低,使胎盘滋养层细胞的侵润和迁移能力下降,从而可能导致sPE的发生。这些结果提示IGF2BP2在胎盘中的异常表达可能是引发PE的病因之一。但是,IGF2BP2在胎盘发育和滋养层细胞功能中的具体分子机制仍待研究。本课题研究旨在阐明IGF2BP2在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用及其分子机制,以期进一步了解IGF2BP2在PE发生中的可能作用。目的通过本研究,阐明IGF2BP2在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用及其分子机制,以期进一步了解IGF2BP2在PE发生中的可能作用。材料和方法1.收集符合纳入和排除标准的孕产妇胎盘组织样品。充分洗净后,根据实验需要进行OCT包埋和液氮冷冻保存。2.提取收集到的符合纳入排除标准的sPE胎盘和与其孕龄相匹配的正常产妇胎盘的总蛋白,通过Western Blot技术检测IGF2BP2蛋白的表达。3.收集孕8-10周的早期胎盘绒毛组织利用免疫荧光技术对IGF2BP2的组织细胞定位进行检测。4.敲低IGF2BP2基因,在HTR-8/SVneo细胞中通过Transwell侵润/迁移实验探究是否影响HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移。5.敲低HTR-8/SVneo细胞中的IGF2BP2基因,通过转录组RNA测序和转录因子预测以及文献挖掘来预测IGF2BP2直接作用的靶基因。将HMGA2作为IGF2BP2待选的靶基因之一,通过RNA结合蛋白免疫沉淀实验证实。6.敲低HTR-8/SVneo细胞中的HMGA2基因,通过Transwell侵润/迁移实验探究是否影响HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移。结果1.sPE胎盘中IGF2BP2的表达相比于正常胎盘显著降低。2.IGF2BP2在人早期胎盘绒毛组织CT细胞和ST细胞中表达。3.敲低IGF2BP2基因HTR-8/Svneo细胞侵润和迁移能力显著下降。4.HMGA2是IGF2BP2的直接结合底物。5.敲低HMGA2基因HTR-8/Svneo细胞侵润和迁移能力同样显著下降。结论本课题研究发现敲低IGF2BP2基因后使HTR-8/Svneo细胞的侵润/迁移能力显著降低,这种变化可能是通过使其下游直接结合底物HMGA2 mRNA的稳定性下降所致。