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本文旨在研究用于禽流感H5、H7、H9亚型同步检测的压电免疫传感器阵列,为禽流感的快速检测提供新的方法学依据。
以抗原为生物敏感材料,研究了不同固定方法,不同电极对抗原固定效果的影响。抗原固定方法采用戊二醛交联法和胱胺自组装法,电极采用金、银两种。结果显示戊二醛交联法制作的敏感膜在抗原固定量、检测重复性、灵敏度、响应特性、重复再生能力等方面均优于胱胺自组装法,而金、银两种电极对传感器检测性能的影响无显著性差异。选用银电极表面的戊二醛交联法,进一步对粘附剂粘附时间、交联剂浓度及反应时间、抗原稀释液的pH和离子强度、抗原固定浓度和时间、封阻剂等条件进行优化。结果表明,预处理后的石英晶体银电极表面滴加40 g/L的聚乙烯亚胺甲醇溶液,室温30 min,滴加2.5%戊二醛溶液,37℃30 min,抗原稀释液为0.01 mol/L,pH 7.4的PBS,禽流感H5、H7、H9三种抗原的最佳固定浓度分别为0.761、0.876、0.748 mg/mL,37℃1 h,封阻剂为阴性血清和5%牛血清白蛋白(BSA)。
以AT切9.8.MHz的表面镀银石英晶体作为基体传感器,制作了四通道的压电石英晶体传感器阵列及振荡电路,建立了禽流感H5、H7、H9三种亚型的同步检测方法。将禽流感H5、H7、H9三种亚型的纯抗原采用戊二醛交联法分别固定于传感器阵列的三个银电极表面,同时以HI全抗原为阴性对照。结果表明,该传感器阵列对禽流感H5、H7、H9三种亚型的检测线性范围为0.2~1.2 mg/mL,相关系数分别为0.9829、0.9719、0.9665,检测下限均为0.2 mg/mL。将所制备的禽流感压电免疫传感器阵列用于实际鸡血清样品检测,准确率达85.9%,结果与血凝抑制法一致性较好。表明该传感器阵列可以用于禽流感H5、H7、H9三种亚型的定性、定量检测,具有较好的应用前景。