鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）是目前威胁和危害水禽养殖业健康发展更的重要病原之一，可引起鸭、鹅等多种水禽发病死亡，但其感染机制尚未清楚。本实验室前期通过高通量测序分析发现，DEV感染后鸭脾脏JAK-STAT信号通路的转录水平差异显著。JAK-STAT信号通路是细胞因子信号传导的重要途径，由多种细胞因子、生长因子以及受体所激活，广泛参与细胞增殖、分化、凋亡、免疫调节、血管生成、氧化应激、炎症反应以及肿瘤生成等过程。因此，本研究拟在前期研究基础上，采用荧光定量PCR和ELISA来验证DEV感染后JAK-STAT信号通路相关基因及其蛋白的表达规律，以期为DEV致病机制的阐明提供重要的理论数据。　　1.JAK-STAT信号通路相关基因克隆与生物信息学分析　　为分析JAK-STAT信号通路相关基因及其编码蛋白的分子特征，本实验选择JAK-STAT信号通路的三个主要基因(JAK2基因、STAT3基因和SOCS1基因)，以三穗麻鸭为研究对象，采用PCR方法进行克隆、鉴定与测序后，应用生物信息学软件进行分析，结果显示：三穗麻鸭JAK2基因长3393bp，可编码1130个氨基酸，与原鸡亲缘关系最近，核苷酸序列同源性达94.5%，氨基酸序列同源性97.6%；编码蛋白二级结构以无规则卷曲、α-螺旋和延伸链区域为主，具有N-末端FERM结构域和SH2域，且无跨膜区和无信号肽区域；三级结构呈弯曲螺旋结构。STAT3基因长2112bp，可编码703个氨基酸，与原鸡亲缘关系最近，核苷酸序列同源性达91.6%，氨基酸序列同源性98.7%；编码蛋白的二级结构以无规则卷曲、α-螺旋和延伸链区域为主，具有alpha 结构域和SH2区，且无跨膜区和无信号肽区域；三级结构呈弯曲螺旋结构。SOCS1基因长624bp，可编码207个氨基酸，与雁属动物亲缘关系最近，核苷酸序列同源性达97.6%，氨基酸同源性达99.5%；编码蛋白的二级结构以无规则卷曲、α-螺旋和延伸链区域为主，具有一个中央SH2区和SOCS盒，且无跨膜区和无信号肽区域；三级结构呈弯曲螺旋结构。这些结果为DEV感染对三穗麻鸭JAK-STAT信号通路的影响研究奠定了基础。　　2．DEV感染后鸭机体组织JAK-STAT信号通路相关基因的转录变化　　以前述三穗麻鸭JAK2、STAT3和SOCS1基因序列设计特异性引物，建立实时荧光定量PCR方法后，选取健康三穗麻鸭，人工感染DEV，采集不同时间感染鸭组织样本，提取组织总RNA，实时荧光定量PCR方法检测分析鸭机体组织JAK2、STAT3和SOCS1基因转录水平，结果：以JAK2、STAT3和SOCS1基因阳性重组质粒为模板，实时荧光定量PCR扩增曲线具有良好的平行性，熔解曲线随稀释梯度呈平缓下降，具有单一熔解峰，无非特异性扩增曲线和引物二聚体，PCR方法扩增效率E、线性回归R2和斜率S均接近理想值，表明本实验成功建立了JAK2、STAT3和SOCS1基因的q-PCR方法。以建立的q-PCR方法检测发现，DEV感染12h到96h，JAK2基因在心脏、脾脏、脑和肌肉中的转录水平总体呈现先下降后上升趋势，而在肝脏、肺脏、肾脏、胸腺、十二指肠和法氏囊中的转录水平总体呈现先上升后下降趋势；STAT3基因在心脏、肝脏、法氏囊和肌肉中的转录水平总体呈现先下降后上升趋势，而在脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺和十二指肠中的转录水平总体呈现先上升后下降趋势；SOCS1基因在心脏、肺脏、肾脏、脑、十二指肠、法氏囊和肌肉中的转录水平总体呈现上升趋势，在肝脏和脑中的转录水平总体呈现先上升后下降趋势，而在脾脏中的转录水平总体呈现先下降后上升趋势。　　3．DEV感染后鸭机体组织JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达变化　　如上采集人工感染DEV后不同时间的鸭组织样本，研磨离心取上清，采用市售的ELISA检测试剂盒检测分析JAK2、STAT3和SOCS1蛋白的表达水平，结果显示：DEV感染12h到96h，JAK2蛋白在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、脑、胸腺、十二指肠、法氏囊和肌肉中的表达水平均低于正常对照组；STAT3蛋白在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、脑、胸腺、十二指肠、法氏囊和肌肉中的表达水平亦低于正常对照组；而SOCS1蛋白在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、脑、胸腺、十二指肠、法氏囊和肌肉中的表达水平高于正常对照组。　　结论：　　1．成功克隆了三穗麻鸭JAK2基因、STAT3基因和SOCS1基因编码区，基因全长相应为3393bp、2112bp和624bp，相应编码1130、703和207个氨基酸。　　2．DEV感染对鸭机体组织JAK-STAT信号通路相关基因JAK2、STAT3和SOCS1基因的转录水平均有不同程度的影响。　　3．DEV感染可下调鸭机体组织JAK-STAT信号通路中JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达水平，可上调SOCS1蛋白的表达水平。