论文部分内容阅读
环境胁迫会使植物细胞中积累大量的活性氧,如果这些活性氧得不到有效清除就会对植物造成伤害。抗坏血酸过氧化物酶是植物体内酶促脱毒系统的重要酶类,它是一个含血红素的蛋白,主要清除植物体内的H2O2,从而提高植物体在抗逆方面的能力。本研究以741毛白杨为材料,从中克隆得到了八条APX的编码序列,并初步对部分基因的生化特性和其在7~8年生毛白杨不同组织部位的表达量进行了分析。主要的研究内容和实验结果如下:
本文运用电子克隆的方法,结合毛果杨基因组序列,推断出毛果杨的七条APX的编码序列,分别命名为PpAPX1~PpAPX7。然后通过RT-PCR方法合成毛白杨的cDNA。以毛白杨的cDNA为模板,克隆得到741毛白杨的八条APX的编码序列,分别命名为PpAPX1~PpAPX8。
对APX的生化特性进行研究,分别构建了pET30a—(+)-PpAPX1~pET30a—(+)PpAPX8的原核表达载体,利用1Mm IPTG分别诱导。通过镍离子层析柱一步纯化法获得重组PpAPX1~PpAPX4蛋白。利用双倒数作图法分别求得重组PpAPX1~PpAPX4蛋白的两个底物对应的米氏常数Km,最大反应速度Vm,转换数Kcat,并测得其最适反应温度和最适pH值,同时还分析了1mM ASA对其活性的影响。这些研究为继续研究APX蛋白的酶学性质奠定了基础。
运用实时定量PCR方法,分别求得PpAPX1、PpAPX2、PpAPX4、PpAPX—1u在7—8年生毛白杨不同组织部位的表达差异。发现PpAPX1、PpAPX4、PpAPX—1u在毛白杨的老叶叶肉中的含量最多,而PpAPX2在新叶叶肉中含量最多。这可能与APX为一种抗逆基因和APX各同工酶在不同的组织部位的表达差异有关。