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目的:建立流式微球分析(cytometric bead assay,CBA)技术检测人心肌钙蛋白T(cTnT)方法。 方法:用鼠抗人的cTnT的单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上,用封闭液封闭微球上未结合单抗的位点,然后再用包被好的微球与检测标本进行抗原抗体免疫反应,并加入羊抗人cTnT的多克隆抗体和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的驴抗羊的多克隆抗体,室温避光免疫反应一定时间,洗涤后,上流式细胞仪检测FITC的荧光强度,以此测定标本中cTnT含量。通过加入不同含量的鼠抗人cTnT单克隆抗体与已激活的微球进行偶联,再与过量FITC标记羊抗鼠IgG反应,根据检测到的荧光强度,选择适当的鼠抗人cTnT单克隆抗体加入量;加入标本和抗体后,通过免疫反应不同的时间,选择最适免疫反应时间;加入标本和抗体免疫反应后,通过洗涤不同的次数,选择适当的洗涤次数;通过加入不同浓度的羊抗人cTnT多克隆抗体与一定量的cTnT标准品、一定量的偶联微球和过量的FITC标记驴抗羊IgG免疫反应,根据检测到的荧光强度,选择适当的羊抗人cTnT多克隆抗体工作浓度;通过加入不同浓度的FITC标记驴抗羊IgG与一定量羊抗人cTnT多克隆抗体、一定量的cTnT标准品、一定量的偶联微球免疫反应,根据检测到的荧光强度,选择适当的FITC标记驴抗羊IgG为最佳工作浓度。在各种抗体加入量和免疫反应最佳条件下,对本法进行方法学评价。 结果:通过实验摸索,选择每1.25×106个微球加入10μg的鼠抗人cTnT单克隆抗体为最佳加入量;加入标本和抗体后,选择避光免疫反应120min,洗涤一次,上流式细胞仪检测;选择8μg/ml羊抗人cTnT多克隆抗体为最佳工作浓度;选择20μg/ml FITC标记驴抗羊IgG为最佳工作浓度。在各种抗体加入量和免疫反应最佳条件下,本方法的检测灵敏度为16.0pg/mL,线性范围是80-5000 pg/mL,批内重复性变异系数为5.2-11.3%,回收率是94.7-11.5%,高浓度的甘油三脂、胆固醇和胆红素的干扰率分别为7.0%-13.5%、9.4%-17.5%和5.4%-16.8%,与Roche Elecsys的电化学发光法无显著差异。 结论:血浆cTnT可以用CBA技术进行检测,为cTnT的检测提供了另一种选择,有助于cTnT检测试剂盒的进一步研制,也为荧光编码微球进行多指标的检测方法研究提供了方向,打下了基础。