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目的通过辛温通阳中药葱白提取物和逐瘀中药大黄提取物不同配伍比例治疗急性心肌缺血的对比研究,探讨通阳逐瘀法对急性心肌缺血大鼠MAPKs/IL-6信号通路的调节作用及机制研究,初步揭示通阳逐瘀法治疗急性心肌缺血的生物学基础。方法本研究选用健康纯种SD雄性大白鼠,体重为200-230克,3-4月龄64只随机分为正常对照组、空白模型组、葱白提取物组、葱白提取物与大黄提取物7：3、5：5、3：7组、大黄提取物组及硝酸甘油组,共8组,每组8只。参照郭延松等的方法制备急性心肌缺血模型,适应性喂养1周后,将大鼠腹腔注射3.5%戊巴比妥钠腹腔注射(35mg/kg)麻醉,仰位固定于鼠板上,将大鼠与powerlab/8s型八导数据分析记录仪连接好,于开胸前记录一段正常心电图,随后将大鼠气管切开连Y型气管插管,另一端连与动物微量呼吸机出气孔,以10x60ml/min持续进气,然后开胸结扎左冠状动脉制备急性心肌缺血模型,于造模后十二指肠给药,4小时后观察相关指标,各药物组给相应浓度药物,假手术组与模型组给予同体积的生理盐水,用注射器于结扎后5分钟给药,4h后采集血样及心脏。在腹部中线偏左开口找到十二指肠备用,用生理盐水纱布覆盖伤口,4小时后采集血样及心肌组织,观察相关指标,给药体积为2ml/kg,正常对照组和空白模型组给与同等体积生理盐水、葱白提取物组按600mg·kg-1给药、大黄提取物组按400mg·kg-1给药、葱白提取物与大黄7：3、5：5、3：7组按葱白与大黄上述浓度混合、硝酸甘油组按80mg·kg-1给药,观察4小时后,再次检测心电图,观测完毕后,立即以血管钳暂时夹闭大鼠胸壁,快速行大鼠腹主动脉取血,立即将其中2ml血注入含有10%EDTA二钠30μl和胰肽酶40μl的试脉中,混匀,4℃,3000rpm离心10min,分离血浆,放置于-70℃冰箱中保存待测,其余血3500rpm离心20min,取上清,分装后置于-70℃冰箱中保存待测。测定前,将样本置于冷水中复融,混匀,再次4℃,3000rpm离心5min,取上清液测定。通过标准Ⅱ导心电图观测(标准电压为0.1mv,走纸速度50mm/s),分别分别记录给药前后心电图,测量ST段上移平均数,给药前后心电图ST段变化。通过HE染色分析大鼠心肌组织病理变化,ELISA法检测血清cTnI、 CK-MB、LDH、IL-6的含量。采用化学方法检测心肌组织H2S含量。WesternBlot法检测P-ERK、P-JNK、P-p38在急性心肌缺血大鼠心肌组织中的表达,用实时荧光定量PCR技术检测急性心肌缺血大鼠心肌组织中IL-6mRNA的表达；采用超声技术检测急性心肌缺血大鼠心功能。结果1.对急性心肌缺血大鼠心电图、左心功能、心肌损伤标志物的影响：与正常对照组之间比较,空白模型组大鼠ST段显著升高(P<0.01)；与空白模型组比较,大黄提取物组无显著性差异(P>0.05),其余各治疗组织组均可降低大鼠ST段(P<0.05,P<0.01),葱白提取物组效果最为显著(P<0.01),通阳逐瘀组之间没有显著差异(P>0.05)。与正常对照组比较,空白模型组大鼠血清cTnI明显升高(P<0.01)；与空白模型组比较,各治疗组大鼠血清cTnI水平明显降低(P<0.05,P<0.01),葱白提取物组降低最为明显,优于各治疗组,通阳逐瘀组之间没有显著差异(P>0.05)与正常对照组比较,空白模型组大鼠血清CK-MB明显升高(P<0.01)。与空白模型组比较,各治疗组大鼠血清CK-MB明显降低(P<0.05,P<0.01),葱白提取物组与硝酸甘油组降低最为明显,组间无显著差异(P>0.05),葱白提取物组疗效优于大黄提取物组及通阳逐瘀组。与正常对照组比较,空白模型组大鼠血清LDH明显升高(P<0.01)。与空白模型组比较,各治疗组大鼠血清LDH明显降低(P<0.05,P<0.01),大黄提取物组、通阳逐瘀组和硝酸甘油组之间相比较无显著性差异,优于葱白提取物组,通阳逐瘀组之间没有显著差异(P>0.05)。与正常组比较,空白模型组EF、FS、Em/Am值明显降低(P<0.01)；与模型组比较,各治疗组EF, FS值、Em/Am(除大黄提取物组外)值明显升高(P<0.01)；对EF值和FS值的影响,通阳逐瘀组之间、通阳逐瘀组和葱白提取物组没有显著差异(P>0.05),优于大黄提取物组和硝酸甘油组(P<0.05)；对Em/Am值的影响,通阳逐瘀组之间、通阳逐瘀组和硝酸甘油组没有显著差异(P>0.05),优于葱白提取物组。2.对急性心肌缺血大鼠组织形态学的影响心肌组织切片经HE染色,光镜下观察各组大鼠心肌细胞病理变化,结果显示：正常组：大部分心肌纤维结构正常,排列成束,心肌细胞椭圆形或短梭形,位于细胞中央,肌纤维间散在毛细血管。模型组：心肌纤维肿胀,部分心肌纤维断裂,可见小灶性肌纤维坏死,肌纤维结构不清清；肌纤维间毛细血管扩张充血,及炎细胞灶性浸润。葱白提取物组大部分心肌纤维结构正常,仅见少数肌纤维肿胀,排列成束,肌纤维间散在毛细血管,未见灶性坏死。通阳逐瘀(7：3)组部分心肌纤维结构正常,见少数肌纤维肿胀,肌纤维间毛细血管增多。其余各治疗组可见部分心肌肿胀,结构模糊,部分心肌纤维断裂,肌纤维间少数毛细血管扩张充血管增多。3.对急性心肌缺血大鼠心肌组织H2S的影响与正常对照组比较,空白模型组H2S水平明显降低(P<0.01)；与空白模型组比较,各治疗组H2S水平显著升高(P<0.01),通阳逐瘀(7：3)组升高H2S水平最为显著,明显优于葱白提取物组、大黄提取物组、硝酸甘油组和其它通阳逐瘀组。4.对急性心肌缺血大鼠MAPKs的影响与正常对照组比较,模型组P-ERK的表达显著升高(22.54%),提示造模成功。与模型组比较,除通阳逐瘀(7：3)组外(P>0.05),其余各治疗组P-ERK显著减少,各干预组抑制率分别为：通阳逐瘀(5：5)组为6.29%、硝酸甘油组为8.94%、葱白提取物组为9.05%、大黄提取物组为11.17%、通阳逐瘀(3：7)组为13.34%。与正常对照组比较,模型组P-JNK蛋白表达显著升高(44.58%),提示造模成功。与模型组比较,各治疗组P-JNK显著降低。各干预组抑制率分别为：通阳逐瘀(3：7)组为14.17%、通阳逐瘀(5：5)组为24.83%、大黄提取物组为25.59%、葱白提取物组为26.37%、硝酸甘油组为26.56%、通阳逐瘀(7：3)组为31.73%。与正常对照组比较,模型组P-p38蛋白表达显著升高(88.0%),提示造模成功。与模型组比较,各治疗组P-p38表达显著降低,各干预组抑制率分别为：大黄提取物组为18.91%、通阳逐瘀(3：7)组为24.31%、通阳逐瘀(5：5)组为31.64%、葱白提取物组为44.20%、通阳逐瘀(7：3)组为45.25%、硝酸甘油组为45.29%。5.对急性心肌缺血大鼠心肌组织IL-6的影响与正常对照组比较,模型组大鼠血清IL-6含量明显升高(P<0.01)；与空白模型组比较,除通阳逐瘀(3：7)组外,其余各治疗组均可以降低血清IL-6含量,通阳逐瘀(7：3)组降低血清IL-6水平最为显著(P<0.01),优于通阳逐瘀(5：5)组、葱白提取物组、大黄提取物组和硝酸甘油组(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠心肌组织IL-6mRNA水平明显升高(P<0.05),扩增倍数为1.00；与空白模型组比较,各治疗组均可降低IL-6mRNA水平,个干预组抑制率分别为：葱白提取物组为16.49%、硝酸甘油组为27.33%、大黄提取物组为30.5%、通阳逐瘀(5：5)组为41.32%、通阳逐瘀(3：7)组为41.96%、其中通阳逐瘀(7：3)组为45.98%。结论①通阳逐瘀法干预急性心肌缺血的免疫机制可能与激活MAPKs及IL-6mRNA表达,影响MAPKs/IL-6信号转导通路有关。②通阳逐瘀法通过改善心电图、提高心功能、抑制心肌酶外漏,减轻心肌损伤。③通阳逐瘀法通过对气体信号分子H2S的调控发挥对缺血心肌的保护作用。④通阳逐瘀不同比例组中以葱白：大黄(7：3)组疗效为优,但是由于作用环节和作用靶点的不同,药物成分的目前有些不清楚,对其整体优势的评价还有待进一步深入研究。