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栀子(Gardenia jasminoides Ellis)又名山栀子,是茜草科桅子属的一种常绿灌木。其果实不仅含有丰富的色素成分,被广泛用作食品添加剂和工业染料,也是我国的传统中药,具有利胆消炎的作用,临床上用于治疗胆囊炎、黄疸性肝炎等。本文研究了如何从栀子果实中同步提取、分离栀子黄色素和栀子苷的方法,以及栀子黄色素和栀子苷的纯化和转化工艺条件,并对栀子黄色素、藏花酸和栀子苷的体外抗氧化能力进行了初步的研究。
采用超声波法提取,确定了栀子黄色素和栀子苷的最佳提取工艺条件为:提取溶剂为40%乙醇溶液,提取时间40min,提取温度60℃。同时以溶剂用量、提取率、得率和色素质量为指标,对浸提法、超声波法和超声波逆流法的提取效果进行比较,结果表明,超声波逆流法的提取效果较好。
采用大孔树脂精制栀子黄色素,通过静态吸附实验和动态洗脱实验,筛选出LD605、D3520、D4020大孔树脂对栀子黄色素的精制效果较好,经LD605树脂精制后的栀子黄色素色价达到432,OD比值为0.49,得率1.12%。采用膜分离法精制栀子黄色素,提取液经陶瓷膜微滤和有机膜超滤分离后,精制的栀子黄色素色价达到209,OD比值为0.52,得率2.53%。同时对栀子黄色素稳定性的影响因素进行了研究,结果表明,栀子黄色素在温度大于80℃的条件下易发生氧化,并且精制后的色素更易降解。采用碱解法对精制后的栀子黄色素进行水解转化,得到的藏花酸通过甲醇除杂,重结晶后,经高效液相色谱(HPLC)检测含量达到98.43%,得率8.42%。
采用H103大孔树脂对栀子黄色素精制废液中的栀子苷进行富集分离,得到的栀子苷经HPLC检测含量达到50.75%,得率3.64%。采用硅胶吸附层析法分离纯化栀子苷,正丁醇作为流动相,得到的栀子苷经HPLC检测含量达到91.77%,回收率44.94%。采用中压层析柱制备栀子苷,乙酸乙酯-甲醇(3:1,v/v)作为流动相,分离得到的栀子苷再用乙酸乙酯一甲醇溶剂体系进行重结晶,最终得到的栀子苷经HPLC检测含量达到88.00%,栀子苷回收率57.81%。采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备栀子苷,以正丁醇-水(1:1,v/v)作为两相溶剂系统,得到的栀子苷经HPLC检测含量达到92.81%,回收率74.88%。使用β-葡萄糖苷酶对纯化的栀子苷进行酶解,用比色法和HPLC法检测,确定了β-葡萄糖苷酶水解栀子苷的最适条件:pH5.0,温度50℃,水解时间40min,加酶量913.63U/g。
以羟自由基(·OH)清除率,超氧阴离子自由基(O2-·)清除率,还原力为指标,对栀子黄色素、藏花酸和栀子苷的体外抗氧化能力进行了研究,结果表明:栀子黄色素和藏花酸具有一定的还原力,对·OH和O2-·有一定的清除作用;栀子苷没有表现出还原力,对·OH和O2-·没有清除作用。