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研究背景宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其中鳞状细胞癌是最常见的组织学类型。患者的预后与肿瘤的浸润和转移密切相关,淋巴转移是恶性肿瘤转移的是重要途径,肿瘤细胞的淋巴转移依赖于新生淋巴管生成（lympghangiogenesis）,血管内皮生长因子C（VEGF-C）是VEGF家族之一,能结合并激活VEGFR-3,参与淋巴管形成,在肿瘤的淋巴转移中起重要可作用。VEGFR-3属酪氨酸酶受体家族成员,主要局限于淋巴管内皮细胞表达,是淋巴管内皮细胞特异的分子标志物。目前,VEGF-C在肺癌、胃癌、宫颈癌、前列腺癌等多种肿瘤的表达及其与淋巴结转移的关系,已引起学者广泛关注。然而VEGF-C的表达与宫颈鳞癌淋巴管生成以及淋巴转移的研究,在国内外文献中报道较少。本实验采用免疫组织化学方法检测VEGF-C及其受体VEGFR-3在宫颈鳞癌、CIN和正常宫颈上皮组织中的表达及其相互关系。材料和方法收集金华市人民医院和金华市中心医院1998年1月-2004年12月间手术切除的子宫颈鳞状细胞癌的存档组织蜡块共86例,其中浸润性癌66例,CINⅢ20例,浸润性癌切除范围包括盆腔淋巴结清扫,CINⅢ标本为全子宫切除或宫颈切除标本。每例均有详细的临床资料、手术记录,有两位病理医师阅片确认。术前均未接受化疗和放疗。患者年龄24-72岁,中位年龄45.5岁。标本经中性4%甲醛固定。参照国际妇产科联盟（FIGO）的临床分期标准,浸润性癌中Ⅰ期29例,Ⅱ期8例,Ⅲ期29例,淋巴结转移27例,无淋巴结转移39例。CINⅠ和CINⅡ均为12例,取自活检病例和宫颈切除标本。正常宫颈组织10例,取自子宫良性病变的手术标本。免疫组织化学采用EnvisionTM二步法。切片厚4μm,脱蜡至水化。置于3%H2O2内5分钟灭活内源性过氧化物酶。抗原热修复后,自然冷却20分钟,滴加一抗,4℃冰箱过夜,PBS冲洗,2分钟×3次;滴加二抗-HRP多聚体,37℃温箱内孵育20分钟,PBS冲洗2分钟×3次;DAB显色,蒸馏水冲洗、苏木素衬染,乙醇脱水,二甲苯透明,中性树脂封固。兔抗人VEGF-C多克隆抗体（克隆号:41181066,1:200）,兔抗人VGFR-3（flt-4）多克隆抗体（克隆号:41090982,1:200）均为Santa Cruz公司产品。EnvisionTM试剂盒购于北京中山试剂公司。VEGF-C、和VEGFR-3阳性对照组织为试剂公司提供的阳性对照片,以PBS缓冲剂代替一抗作阴性对照。VEGF-C在细胞胞质内呈棕黄色颗粒沉着为阳性细胞。参考相关文献资料VEGF-C计数标准,无染色或阳性细胞百分比＜10%为阴性-;阳性细胞数11%-30%为（+）,阳性细胞数31%-50%为（++）,阳性细胞数＞50%为（+++）。VEGFR-3在脉管内皮细胞胞桨和胞膜呈现棕褐色为阳性,VEGFR-3脉管判断标准及计数方法,每张切片在低倍镜（100X）下寻找VEGFR-3脉管最有代表性区域,即热区,计数5个热区中VRGFR-3阳性脉管数,取平均值采用双盲法计数阳性细胞数和脉管数。统计用SPSS11.0软件包,对计数资料不同组间比较以及与临床病理指标之间的相关性行卡方检验,对计量资料行t检验,对VEGF-C和VEGFR-3相关性分析行spearman等级相关检验。结果宫颈浸润性鳞癌中VEGF-C表达阳性率为75.8%,而正常宫颈上皮、CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ则分别为30%、41.7%、41.7%和45%。浸润性鳞癌和正常上皮组间差异具有统计学显著性意义（p＜0.01）。宫颈鳞癌VEGF-C表达水平和间质VEGFR-3阳性淋巴管数分别与FIGO分期和局部淋巴结转移呈正相关,均具有统计学显著性意义（见表1）。Sperman相关分析发现,宫颈鳞癌VEGF-C表达水平和VEGFR-3阳性脉管数之间呈明显正相关（r=0.614,p=0.000）（见表2）。a指正常组和浸润组VEGF-C表达差异比较,X2=9.741,P＜0.01;b指浸润性癌Ⅰ期和Ⅲ期VEGF-C表达差异比较,X2=10.213,p＜0.01;c指淋巴结转移阴性和阳性组VEGF-C表达差异比较,X2=7.956,p＜0.01;d指正常组和浸润组VEGFR-3阳性脉管均数比较,t=4.976,P＜0.001;e指浸润性癌Ⅰ期和Ⅲ期VEGFR-3阳性脉管均数比较,t=4.632,P＜0.001:f指淋巴结转移阴性和阳性组VEGFR-3阳性脉管均数比较,t=9.723,p＜0.001;r=0.614 P=0.000结论1,宫颈浸润性鳞癌的VEGF-C表达水平显著高于正常宫颈上皮和CIN病变,提示VEGF-C表达水平与宫颈鳞癌的发生和浸润可能存在密切的联系。2,宫颈浸润性鳞癌VEGFR-3阳性脉管均数显著高于正常宫颈上皮和CIN病变,提示淋巴管的生成增加在宫颈鳞癌发生浸润的过程中可能发挥了重要的作用。3,在宫颈浸润性鳞癌中,VEGF-C表达水平和VEGFR-3阳性脉管数与临床分期和淋巴结转移均有相关性。4,在宫颈浸润性鳞癌中,VEGF-C表达水平和VEGFR-3阳性脉管数呈正相关,提示两者之间存在密切关系。