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目的:抑郁症的病因极其复杂,涉及遗传、情绪调节能力、线粒体功能障碍、神经内分泌和神经免疫等因素。炎症导致神经元功能下降,而受损的神经元是导致脑部疾病病变的基础,炎症被认为是抑郁症的危险因素,也是抗抑郁治疗的重要靶点之一。线粒体功能障碍也是导致神经细胞衰老和功能障碍的重要原因。本研究采用脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞株BV2活化建立神经炎症模型及脂多糖诱导小鼠抑郁症模型,探讨一种活性多肽对小胶质细胞活化引发炎症反应介导抑郁症的影响并探讨其作用机制,为活性多肽应用于抑郁障碍的预防和治疗提供初步的实验依据。方法:体外实验:(1)本研究通过脂多糖(100ng/m L)刺激小胶质细胞株BV2建立神经炎症模型:ELISA法初步筛选出具有抑制小胶质细胞分泌炎症因子的活性多肽;MTT法检测不同多肽对BV2细胞的毒性作用。(2)体外模拟炎症对神经元的影响,主要分为Ctrl、CM-LPS、CM-pp-3(100μM)、CM-pp-3(200μM)共4组。通过脂多糖筛选出具有减轻细胞损伤的活性多肽培养BV2细胞后得到的条件培养基去培养神经母瘤细胞系SH-SY5Y细胞,应用MTT法、Hoechst33342、流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色法检测多肽对炎症炎症造模的SH-SY5Y细胞活力、细胞核变化、细胞周期分布以及衰老表型变化的影响。(3)研究多肽对脂多糖诱导BV2细胞损伤的保护作用:使用β-半乳糖苷酶染色、Hoechst33342等方法检测BV2细胞早衰表型、细胞核变化情况;流式细胞术检测周期分布、ROS水平和线粒体膜电位变化;Griess法检测不同组别的NO水平;免疫细胞荧光染色检测BV2细胞的NF-κB激活情况;Western blots检测Sir T 1,p53,p21,Cyclin D1等衰老相关蛋白。体内实验:实验分为5组,分别为正常对照组、模型组(LPS,1mg/kg)、多肽低剂量组(25mg/kg)、多肽高剂量组(50mg/kg)、谷胱甘肽组(50mg/kg)。通过对8周龄C57BL/6雄性小鼠腹腔注射脂多糖(1mg/kg)建立炎症相关的抑郁症模型并探究一种活性多肽在其中的改善作用及机制:进行SPT、OFT、TST等抑郁样行为检测;比较不同组别的小鼠在造模24h后的体重变化;对眼部、背部皮毛状态进行评估;ELISA法检测外周血清和脑组织中的IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子的水平;Western blots检测脑组织中炎症相关蛋白表达,包括IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS、NF-κB(细胞核和细胞浆中);HE染色检测海马区神经元形态变化;免疫荧光染色法检测海马区小胶质细胞激活情况和Western blots检测小胶质细胞激活标志物Iba-1表达;免疫组化法检测海马区COX IV和Western blots检测脑组织中COX IV表达情况;Western blots检测脑组织中线粒体动力学相关蛋白表达,包括DRP 1、OPA 1、MFN-2。结果:体外实验:(1)ELISA测试中,pp-1、pp-2、pp-3、pp-4四条多肽均能抑制脂多糖诱导BV2细胞产生的IL-6和IL-1β水平;其中pp-1和pp-3在较高浓度不影响BV2细胞活力(MTT法)。(2)与LPS造模组相比,pp-3(100,200μM)组中的SH-SY5Y细胞细胞活力增强、细胞核碎裂情况较少、G2/M期细胞比例相对降低、SA-β-gal阳性细胞数量减少。(3)与LPS造模组相比,pp-3(100,200μM)使BV2细胞中的Hochest浓染减少;SA-β-gal阳性染色减少;NO、ROS水平显著下降,部分恢复了线粒体膜电位,降低了损伤所致G1/S期阻滞比例,抑制了周期相关蛋白p53,p21表达增高,促进了衰老相关蛋白Sir T 1和细胞周期素Cyclin D1的表达。体内实验:与LPS模型组相比,多肽pp-3腹腔注射后,抑郁样行为减轻,具体表现为小鼠体重骤减情况好转、眼部和背部皮毛状态转好、蔗糖偏好率升高、旷场实验(OFT)中小鼠进入中间区域的次数和停留时间增多、悬尾实验(TST)中小鼠的相对不动时间减少;外周血清和脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低;Western blots显示IL-1β、IL-6和TNF-α、i NOS等炎性介质的表达下调,核内的NF-κB表达降低;HE结果显示神经细胞状态在一定程度上恢复正常;免疫荧光显示Iba-1阳性细胞数目减少和Western blots中Iba-1蛋白表达降低;免疫组化显示海马CA3区中的COXⅣ蛋白增加(Western blots也得到证实);线粒体动力学相关COXⅣ、MFN-2和OPA1蛋白表达增加,DRP1蛋白表达下降。结论:细胞实验结果表明脂多糖诱导BV2细胞产生的炎症反应对SHSY5Y细胞产生神经毒性作用,表现为衰老相关的周期阻滞和核碎裂;多肽pp-3通过p53通路抑制脂多糖诱导的BV2细胞的早衰表型等。pp-3对BV2细胞的保护作用可能跟介导NF-κB通路抑制炎症介质分泌、抑制ROS水平和保护线粒体膜电位有关。动物实验结果表明多肽pp-3能够减轻C57BL/6雄性小鼠的抑郁样行为,可能与抑制海马区小胶质细胞激活从而介导NF-κB通路阻止过度的炎症反应、维持线粒体分裂和融合的平衡以及保护线粒体呼吸链免受伤害等有关。