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目的：1、研究 GATA4基因对心内膜垫发育过程中相关蛋白表达量的影响；2、探索GATA4基因在EGF介导的MAPK/ERK1/2信号通路调控心内膜垫发育成房室瓣/间隔中的作用机制；3、探索GATA4基因在BMP4介导的MAPK/ERK1/2信号传导通路调控心内膜垫发育成房室瓣/间隔中的作用机制。 方法：1、利用脂质体转染试剂Lipofectamine2000介导重组质粒转染Hela细胞，共分为空白对照组、转染对照组、野生型GATA4转染组、突变型GATA4转染组，分别应用real-time quantitative PCR和Western blotting方法检测转录因子GATA4、Sox9、Scleraxis及细胞外基质Aggrecan、Tenascin的mRNA和蛋白表达量的变化。2、培养Hela细胞达到50％左右汇合时，分为3组：1)空白对照组：即无任何干预措施组；2) EGF组：rHuEGF加到所培养的 Hela细胞中至终浓度为50μg/L；3)U0126+EGF组： rHuEGF加入经U0126预处理30min的Hela细胞中至终浓度为50μg/L。分别于处理后12h收集细胞并提取total RNA和总蛋白，利用转录因子GATA4、Sox9、Scleraxis和细胞外基质Tenascin、Aggrecan的常规抗体，Smad1/5/8、ERK1/2的常规抗体和磷酸化抗体，Western blotting方法检测这些基因的蛋白和磷酸化蛋白水平；同时real-time quantitative PCR定量检测这些基因mRNA的表达水平。3、培养Hela细胞达到50%左右汇合时分为3组：1)空白对照组：即未加任何处理因子的Hela细胞组；2) BMP4组：rHuBMP4加入Hela细胞至终浓度为50?g/L；3)U0126+BMP4组： rHuBMP4加入U0126预处理30min的Hela细胞中至终浓度为50?g/L。于处理6小时后收集细胞，分别提取 total RNA和总蛋白，利用Smad1/5/8、ERK1/2的常规抗体和磷酸化抗体，转录因子GATA4、Sox9、Scleraxis和细胞外基质Tenascin、Aggrecan的常规抗体，采用Western blotting方法检测目的蛋白的表达水平及其磷酸化水平，real-time quantitative PCR方法检测这些基因mRNA的表达情况。 结果：1、野生型转染组、突变型转染组GATA4基因表达水平明显高于空白对照组（P<0.05）和转染对照组（P<0.05），但突变型转染组其表达水平较野生型转染组明显减少（P<0.05）；野生型转染组及突变型转染组Sox9、Scleraxis、Aggrecan、Tenascin表达水平明显高于空白对照组（P均<0.05）和转染对照组（P均<0.05），但突变型转染组较野生型转染组它们的表达水平均明显减少（P均<0.05）。2、EGF处理细胞后GATA4表达量减少（P<0.05），用ERK1/2 MAPK特异性抑制剂U0126抑制后GATA4表达量相对增加但仍低于空白对照组（P<0.05）；EGF组Sox9、Scx、Agc和Tnc表达较空白对照组减少，而EGF+U0126组Sox9、Scx、Agc和Tnc表达均增加（P<0.05）。3、BMP4处理细胞6h后GATA4表达明显上调（P<0.05），而U0126预处理组GATA4表达量较之显著减少（P<0.05）；BMP4处理后pERK1/2表达升高而pSmad1/5/8活性降低，Sox9、Scx、Agc和Tnc表达均增加（P<0.05），U0126预处理组pERK1/2表达降低而pSmad1/5/8活性升高，Sox9、Scx、Agc和Tnc表达较BMP4组均减少（P<0.05）。 结论：1、GATA4基因H436Y突变使GATA4基因转录活性降低从而对下游基因的转录激活作用减弱，进而为阐明GATA4基因在心内膜垫发育成瓣膜中的作用提供了一定的理论基础；2、EGF可以通过ERK1/2信号通路负调控GATA4基因表达，进而下调GATA4下游基因表达，从而在心内膜垫发育过程中发挥一定的作用；3、BMP4可以通过MAPK/ERK信号通路调节GATA4基因表达增加，进而调节Sox9、Scx、Agc和Tnc表达，GATA4通过BMP4介导的MAPK/ERK1/2信号通路在心内膜垫发育成房室瓣/间隔中起到一定的正调控作用。