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心力衰竭是各种心脏病发展到晚期或终末期的结果,是最常见的严重危害人类生命健康的心血管疾病之一,2002年我国心衰患病率已达到0.9%,而且还在呈不断攀升的趋势。由于心衰发病原因的多样性及其发展的长期性,我们对心衰的发病机理还没有明确的认识,也缺乏有效的治疗方案。中药在本病治疗方面有悠久的历史,积累了丰富的临床经验,但是由于对其治疗机理缺乏足够的研究,因此在临床上的推广应用受到严重制约。
注射用益气复脉(冻干)是由天津天士力之骄药业有限公司开发的一种现代复方中药粉针制剂,由红参、麦冬、五味子三味中药组成。在临床上主要用于治疗心衰气阴两虚证,疗效显著,但由于其作用机制不明确,严重影响了其推广应用。
在本研究中我们首先采取基因芯片技术对注射用益气复脉治疗心衰大鼠的作用机理进行系统研究。将实验大鼠分为正常组、假手术组、模型组、给药(注射用益气复脉)组和阳性药(卡托普利)组5组。采用冠脉结扎法制作大鼠心衰模型和H202损伤建立心脏微血管内皮细胞(CMEC)氧化损伤模型。首先在整体动物水平上通过测定心电图、心衰生化指标BNP及病理切片等观察益气复脉的药效,同时考察注射用益气复脉对H202损伤的CMEC的保护作用。在此基础之上利用基因芯片技术对给药组与模型组之间的差异表达基因进行系统筛选,并以Real-time PCR技术对基因芯片的结果进行验证。最后通过生物信息学方法找出注射用益气复脉关键的作用通路。
结果显示结造模后各组大鼠心电图具有不同程度的ST段抬高或紊乱。经过2个月的正常喂养后模型组大鼠逐渐发展为心衰,心电图表现为ST段显著降低。给药组及阳性药组给药2个月后心电图比模型组显著改善。病理切片结果显示模型组表现为心肌纤维浊肿、细胞颗粒溶解、断裂;且间质不同程度出血,室壁明显变薄等特点,而给药组有显著改善;给药组大鼠血浆中BNP的含量也显著低于模型组。基因芯片结果显示注射用益气复脉组与模型组差异表达基因共有211条。其中160条基因表达上调,51条基因表达下调,Real-time PCR验证结果趋势与芯片结果一致。KEGG分析显示差异基因涉及信号通路83条,其中具有显著作用的信号通路有14条,包括VEGF信号通路、MAPK信号通路、Jak-STAT信号通路、钙离子信号通路及Tight junction等多个方面。在进一步的实验中,我们选择其中p38-MAPK信号通路进行验证,结果证明调节p38-MAPK信号通路在注射用益气复脉改善心衰的过程中扮演了关键角色。
本研究从基因角度系统探讨了注射用益气复脉治疗心衰的作用机制,为进一步明确其作用物质基础其作用机制奠定了基础,为临床合理用药提供理论依据。