甲状腺激素(thyroidhormone)通过与广泛分布在各种组织中的甲状腺激素受体(thyroidhormonereceptors,TRs)结合，作用于转录过程实现其对靶基因的正性/负性调节，对于机体的正常分化发育和代谢平衡具有十分重要的作用。TR存在主要两种亚型：TRa和TRβ。TRβ又分TRβ1，TRβ2，TRβ3和TRβ△3等同功体。 在进行国家自然科学基金项目(30271154)关于TRβ基因的研究中，需要对大鼠TRβ1受体cDNA进行克隆。TRβ1基因在多种组织中均有表达，其中肝脏、脑、骨胳肌、心脏、肾脏表达最多。取大鼠肝脏提RNA，以提取的RNAs为模板逆转录合成cDNA第一链。并以之为模板PCR扩增TRβ1双链cDNA。将该cDNA插入pGEM-Teasy载体，并进行DNA序列分析。序列比较发现其与预期之TRβ1有很大不同，即在3和5两端有同源性但在相当于两个外显子3和4序列之间多出一段本是内含子的108bp序列。此段序列并不是来源于变化点(changingpoint)之前，而是来自于甲状腺激素受体β基因3，4“共有”外显子之间的非表达的内含子序列内，通过对其序列进行分析我们发现，此部分很可能是另外一种在变化点之后剪切方式所产生的新的mRNA或在内含子3，4之中还存在另一个外显子。此意外发现的加长型的新的TR同功体mRNA在NCBI的GeneBank注册时，获准登记号为DO191165，命名此新同功体为TRβ△。此发现具有非常重要的科学意义：其一，目前发现的所有的九种TR亚型中，没有任何一种是加长型的，只有截短型的(△α1、△α2和△β3)，我们发现的这一个新亚型β△是迄今发现的唯一一种加长型的TR亚型。其二，目前公认的TRβ基因中有一个变化点，其5端的(即上游)部分在转录中的剪切方式是高度可变的，因此产生了β1、β2、β3、△β3四种T3受体亚型，而其3端的部分在转录中在脊椎动物体内又是高度保守的，而本实验中发现的新的改变恰好发生在变化点之后(下游)的外显子3和4之间，因此对原有变化点是否存在提出了新的质疑。第三，很可能在内含子3，4之内，存在一个过去被忽略而新被发现的一个新外显子。TRβ的全基因组将要修正之。 通过软件预测分析TRβ△与TRβ1的mRNA以及蛋白质在结构与功能上有什么不同。将编码TRβ△的基因片段分别克隆到表达载体pQE-30Xa上，并转化入E.coliM15[pREP4]，进行融合表达。Westernblotting鉴定重组蛋白。目的蛋白含6×His纯化标签，可以经金属螯合亲和层析吸附于Ni-NTA树脂层析柱，梯度增加冲洗液中咪唑浓度以除去非特异吸附的杂蛋白后，将目的蛋白洗脱，超滤离心法浓缩，-80℃保存以备进一步研究。