冬青卫矛内生真菌杀菌活性成分研究

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植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的次生代谢产物,是新化合物、新药物的潜在资源,在农业和医药行业中具有重要的应用前景。本文从冬青卫矛(Euonymus japonicus)内生真菌中筛选到一株产生杀菌活性的菌株,编号为2QR1,并对其代谢产物的活性成分进行了分离和鉴定。主要结果如下:1.采用组织块法,以马铃薯葡萄糖琼脂培养基、冬青卫矛煎汁培养基为内生真菌分离培养基,从冬青卫矛根、茎和叶中分离得到21株内生真菌。从中筛选到一株产生杀菌活性的菌株2QR1。2.对2QR1菌株代谢产物进行了杀菌活性研究。室内生测结果表明,2QR1菌株发酵液的杀菌活性远高于菌丝体提取物的杀菌活性。该菌株发酵液的乙酸乙酯萃取物对小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulata)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、烟草赤星病菌(Alternaria longipes)和马铃薯干腐病菌(Fusarium solani)抑制菌丝生长的EC50值分别为53.6,63.1,63.3,98.2,106.5,115.9和166.3μg/mL;对玉米大斑病菌、烟草赤星病菌、小麦根腐病菌和马铃薯干腐病菌抑制孢子萌发的EC50值分别为94.8,139.1,146.6和180.1μg/mL;在浓度为500μg/mL时,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌圈直径在16mm以上。盆栽试验结果表明,2QR1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物在浓度为2000μg/mL时,对小麦白粉病(Blumeria graminis)的保护作用和治疗作用分别为61.9%和81.6%。3.采用常压柱层析、HPLC等方法,在生物活性追踪指引下,从2QR1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物中分离出化合物B9,经鉴定B9为asterric acid。生测结果表明,B9对玉米大斑病菌、烟草赤星病菌、小麦根腐病菌和马铃薯干腐病菌抑制孢子萌发的EC50值分别为0.8,1.4,3.3和5.0μg/mL。4.采用传统的真菌分类及鉴定方法,用光学显微镜观察2QR1菌株气生菌丝、分生孢子、产孢细胞及菌落性状,对比相关分类系统,将2QR1菌株初步鉴定为半知菌亚门,曲霉属(Aspergillus.sp.sp)真菌。
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