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人绒毛膜促性腺激素(h CG)由α和β两个亚基通过离子键和疏水键结合在一起,分子量大约为39KD,由合体滋养层细胞分泌,为人体胎盘和黄体细胞中产生的一种糖蛋白激素,对着床和胚胎营养有很大作用[1-4]。同时对于妇科炎症、绒毛膜疾病有一定的辅助诊断价值[5,6]。本论文主要进行β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)免疫检测系统(化学发光法)的研发过程探讨及性能评估。研究方法:将郑州伊美诺公司制备的62株β位点抗体进行配对筛选,根据抗原抗体的最优化反应原则,确定包被、样品稀释液、酶结合物和反应模式。并建立校准品系统,试剂盒的线性范围、重复性、准确性、最低检测限、特异性及稳定性指标。检测1302例健康人血清,以测定值的99%为界限,通过SPSS软件计算参考区间。与两家医疗机构合作,进行不同病理人群考核,验证试剂盒的临床准确性。结果:筛选出最优的1对抗体作为试剂盒开发的原材料,并确定了原材料的质量标准及工艺及反应体系。包被:PH6.5,0.2M PB,0.5μg/m L;酶结合物:PH7.5,0.01M Tris-HCl,50%小牛血清;样品稀释液:PH7.5,0.01M TAPS,3%牛血清白蛋白;校准品:PH7.5,0.01M PBS,3%牛血清白蛋白,校准品溯源到国际参考品77364。反应体系:两步法,37℃温育60+30分钟,洗涤5次;底物A、B分别加入50μL,5分钟内测定。试剂盒可以使用的样本为血清。校准曲线的建立为发光值取对数后,采用四参数拟合方式建立校准曲线。试剂盒的线性范围为1.0~1000m IU/m L;分析内变异、分析间变异和批间变异均不超过10%;测定500m IU/m L的LH、500m IU/m L的FSH、500μIU/m L的TSH,检测结果均不超过1.0m IU/m L;样本中添加50mg/d L的胆红素、150mg/d L的血红蛋白和6000mg/d L的甘油三酯对测定结果的影响小于10%;最低检测限测定值不超过1.0 m IU/m L,回收率在0.85-1.15之间。考查了整套试剂盒的加速稳定性、拆封稳定性和实时稳定性,结果均符合要求。参考值设定为5.0 m IU/m L。临床研究:在两家医疗机构(河南省人民医院和河南省中医学院第三附属医院)分别测定110例和236例临床样本,结果显示河南省人民医院结果:考核试剂盒与对比试剂盒的阳性符合率为100%,阴性符合率为100%,总符合率为100%。河南省中医学院第三附属医院结果:考核试剂盒与对比试剂盒的阳性符合率为99.01%,阴性符合率为100%,总符合率为99.03%,两者无明显区别,两者检测数值呈高度相关。结论:本论文评估了β-人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒(化学发光法)的最低检测限、重复性、特异性、准确性、稳定性、建立了试剂盒的参考值、开展了临床应用研究,与已上市的国际同类权威试剂盒平行比对,结果表明本试剂盒临床符合率高、检测准确性好、性能指标达到国际同类厂家水平。