解毒祛瘀滋阴方对T淋巴细胞凋亡以及ERα/β的调节作用研究

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:wushaojunbaobao3
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目的研究解毒祛瘀滋阴方对T淋巴细胞凋亡以及ERα/β的调节作用,初步探索其治疗SLE的机理。方法制备解毒祛瘀滋阴方含药血清,通过HPLC同时测定含药血清中有效成分阿魏酸、异阿魏酸的浓度;分高、中、低含药血清组和空白对照组共4组,使用CCK-8检测解毒祛瘀滋阴方含药血清对T淋巴细胞生长活性的影响;流式细胞术检测解毒祛瘀滋阴方含药血清对T淋巴细胞凋亡的影响;Realtime-PCR检测caspase-3.ERα/βmRNA的表达量;western-blot检测casepase-3的活化以及ERα/β的表达;Dual-luc assay检测ERa/β的转录活性。结果通过HPLC可以同时测定出解毒祛瘀滋阴方含药血清中阿魏酸、异阿魏酸的浓度,高、中、低含药血清中阿魏酸浓度分别为:10.18±0.36μg/mL、6.41±O.2μg/mL、5.88±O.16μg/mL,异阿魏酸:42.23±0.96μg/mL、32.28±0.66μg/mL、27.56±0.46μg/mL;解毒祛瘀滋阴方含药血清能够促进T淋巴细胞早期凋亡与晚期凋亡,高、中、低含药血清组与对照组相比差异显著(P<0.05);高、中、低含药血清干预后,T淋巴细胞Caspase-3mRNA以及蛋白质的表达增加,并呈剂量依赖关系;各组含药血清干预后,T淋巴细胞ERα/βmRNA、蛋白质表达水平降低,并呈剂量依赖关系;高、中、低含药血清干预后,高、中、低含药血清组与对照组相比ERα/β转录活性降低,差异显著(P<0.01),组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论解毒祛瘀滋阴方含药血清可有效的抑制T淋巴细胞增殖、促进T淋巴细胞的凋亡;通过降低ERβ/αmRNA、蛋白质的表达以及转录活性而抑制ER信号通路从而达到治疗SLE的效果。
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