多色荧光原位杂交技术的建立及其在食管癌研究中的应用

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本研究旨在以细胞系为模型建立一种多色荧光原位杂交技术,并将其应用于实体肿瘤的染色体畸变的鉴定。 方法:根据组合标记全染色体涂染探针(wholechromosomepaints,WCP)的原则,采用4种荧光染料(DEAC,FITC,Cy3和Cy5),通过DOP-PCR法(degenerateoligonucleotideprimer-polymerasechainreaction)直接扩增,标记两组多色painting探针池,先后两次杂交到相同的中期染色体片,探针信号通过装备了相应滤镜组合及CCD相机的荧光显微镜捕获,应用MetamorphImagingSystem软件进行图像的摄取和处理,获得多色荧光原位杂交图。结合反相DAPI显带技术,对两例食管癌细胞系KYSE180和KYSE450(均来自男性患者)进行全染色体组畸变分析,根据ISCN(1995)标准鉴定其核型。结果:成功地建立了一种十二色荧光原位杂交技术,应用该技术研究发现KYSE180中畸变最多的染色体是1号、3号、5号、7号和14号。KYSE180的具体核型为:54(51-55),-Y,+der(1)t(6;1)(pter→p10::q10→qter),+der(1)t(1;3)(q31→q10::q21→q26),dup(3)(q24→q26),der(3)del(3)(:p21→q27:),+der(3)del(3)(:p21→q27:),+der(3)t(3;5)(qter→q10::q14→q23),+der(3)t(6;3)(q24→q16::p12→qter),+der(3)t(3;6)(pter→q10::q11→qter),der(4)t(4;8)(p15→qter::q23),der(5)t(5;14;3)(pter→q23::q21→q31::q28→q24),+der(5)t(5;8)(pter→p10::q24→q23),+der(5)t(5;6)(pter→p10::p12→p22),-6,der(6)t(6;3)(pter→q14::q13→q22),del(7)(pter→q32:),+der(7)del(7)(pter→q32:),+der(7)t(10;7)(q21→q10::q10→qter),+der(8)t(8;16;16;2)(p12→q11::p13→p12::q12→q24::p24→p22),-9,-9,der(10)t(14;10)(qter→q10::q10→qter),+11,del(12)(:q10→qter),+der(12)t(4;12;3;2)(p15::p12→q12::q21→q24::p12→p24),-13,-13,der(14)t(5;14;1)(p14::q10→qter::p11→p21),der(14)t(3;14;5)(qter→q13::pter→qter::p14→p11),+der(14)t(14;X;3)(qter→q10::p10→p22::q13→q26),der(15)t(14;15)(q12→q21::pter→qter),der(15)t(18;15)(q22→q10::q10→qter),+der(16)del(16)(:p12→q22:),der(17)t(17;3)(pter→qter::p14→p24),+der(17)t(3;11;17;8)(pter→p14::p14→p11::q10→q24::p22→p12),-18,+der(19)t(10;19)(p12→p11::pter→qter),-20,-22。KYSE450中畸变最1多的染色体是1号、7号、8号、9号和12号染色体。KYSE450的具体核型为:54(51-56)-Y,der(1)t(9;1)(pter→p10::q10→qter),+der(1)t(19;1)(p12→p10::q10→qter),+der(1)t(1;7;7)(pter→p10::p11→p21::q11→q35),+der(2)t(16;2)(q21→q11::q10→qter),del(4)(pter→q24:),der(5)t(5;15)(pter→qter::q21),der(7)t(7;3)(p21→p11::q10→q11),der(7)t(7;11)(p21→q11::q23→q22),+der(7)t(11;7)(qter→q10::q10→qter),+8,+der(8)del(8)(:p22→q12:),+der(8)t(3;8)(q26→q28::p12→qter),+der(8)t(8;4)(p22→q21.1::q32→qter),+der(8)t(8;5)(p12→q21.1::p14),der(9)t(9;12)(pter→q31::q21),der(9)t(17;9)(q22→q24::p21→qter),+der(9)t(9;12)(p21→qter::q21),-10,-10,der(11)t(11;7;5)(p14→qter::q22::q32→q23),der(12)t(12;9)(pter→q24.2::q22→q31),del(12)(pter→q22:),+der(12)t(6;12)(p12::p12→q23),der(14)t(9,14)(q21→q31::pter→qter),+der(14)del(14)(pter→q21:),+der(16)del(16)(:p12→qter),+der(17)del(17)(:p12→q23:),del(18)(pter→q11:),del(19)(pter→q13.1:),-20,-20,-22。两细胞系中染色体易位共同的断点发生于1q10,3q10,3q26,3q28,5p14,6p12,8p12,8p22,11p14,14q21,16p12和17q24等,均没有Y染色体成分。 结论:本研究中建立的十二色荧光原位杂交技术简便易行,适宜用于实体肿瘤的全染色体组的畸变分析。对食管癌细胞系KYSE180和KYSE450核型的鉴定有利于正确地将它们应用于相关科学研究中。
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