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目的(1)探讨广西地区甲状腺乳头状癌(PTC)BRAF基因第15外显子T1799A的突变与临床病理学参数之间的关系,揭示BRAF癌基因突变型PTC组织侵袭性、颈部淋巴结转移及对术后局部复发的影响。(2)探讨BRAF基因突变型和野生型PTC组织中细胞周期调控蛋白CyclinD1、P27蛋白及Na+/I-同向转运体(NIS)、甲状腺过氧化物酶(TPO)蛋白的表达,分析BRAF基因突变与四种蛋白表达的相关性,揭示BRAF基因突变对PTC临床病理特征影响的内在原因和机制。方法收集广西医科大学第一附属医院病理科2004年1月～2010年3月间经手术切除的115例PTC和30例甲状腺良性病变(结节性甲状腺肿20例、甲状腺腺瘤10例)石蜡包埋组织块,DNA提取试剂盒提取石蜡组织切片中的DNA,PCR扩增BRAF基因第15外显子,单链构象多态性分析(single strand conformation polymorphism, SSCP)找出异常条带,对异常条带的PCR扩增产物行DNA序列双向测序分析。免疫组织化学方法(SP法)检测石蜡切片中CyclinD1、P27、NIS和TPO蛋白的半定量表达。比较PTC与甲状腺良性病变组织BRAF基因突变率及CyclinD1、P27、NIS和TPO蛋白表达的差异。所得数据结果应用SPSS13.0统计软件包进行分析,检验水准以P<0.05为差异有统计学意义。结果1. PTC组织中BRAF基因突变率为48.7%(56/115)。DNA正反双向测序结果证实为错义突变,即第15外显子的单个碱基错义突变(T-1799-A)。性别、肿瘤大小(<2cm或≥2cm)对PTC组织BRAF突变率的影响无显著性意义(χ2=0.352,P>0.05;χ2=0.235,P>0.05);年龄组(<45岁与≥45岁)突变率的差异有统计学意义(χ2=6.317,P<0.05);PTC组织亚型(经典型、滤泡亚型、高柱状细胞型)及Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期PTC的BRAF突变率的差异有统计学意义(χ2=20.325,P<0.05;χ2=8.681,P<0.05);肿瘤超过腺体包膜、有无颈部淋巴结转移均对突变率有显著性影响(χ2=20.892,P<0.05;χ2=13.349,P<0.05)。2.(1)PTC组织CyclinD1蛋白的阳性表达率为65.2%(75/115),BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为80.3%(45/56)和50.8%(30/59),差异有统计学意义(P<0.001)。(2)PTC组织P27蛋白的阳性表达率为41.7%(48/115)。BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为25.0%(14/56)和57.6%(34/59),差异有显著性(P<0.001)。(3)PTC组织NIS蛋白阳性表达率为47.8%(55/115),BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为26.8%(15/56)和67.8%(40/59),差异有显著性(P<0.001)。(4)PTC组织TPO蛋白阳性表达率为47.8%(55/115),BRAF MT和WT基因组PTC的阳性表达率分别为32.1%(18/56)和62.7%(37/59),差异有显著性(P<0.001)。(5)Spearman相关性分析,BRAF基因突变与CyclinD1蛋白表达呈正相关(r=0.290, P<0.05);BRAF基因突变与P27、NIS和TPO蛋白表达呈负相关,其相关系数r分别为-0.352,-0.387和-0.298,P值均小于0.05。结论1.广西PTC患者的BRAFT1799A基因突变率高,BRAF基因突变检测可以作为甲状腺良、恶性病变鉴别的辅助指标。2. BRAFT1799A基因突变在致PTC发生发展过程中影响PTC肿瘤细胞的分子生物学改变,可致CyclinD1蛋白表达上调和P27、NIS及TPO蛋白表达下调,PTC组织侵袭力高,颈部淋巴结转移力强。3.联合检测BRAF基因突变及CyclinD1、P27、NIS及TPO蛋白表达情况,有助于对PTC临床情况的判断,为PTC治疗方案的合理制定、评估转移和预后提供理论依据。