地磁活动对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及机制研究

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[目 的]研究地磁活动对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响,并从炎症反应及氧化应激方面探讨其影响是否通过TLR4信号通路来实现,本研究将为临床在地磁爆发时提前对MI/RI进行防治提供理论依据。[方 法]1、大鼠分组及造模:以雄性SPF级SD大鼠为实验对象,首先将随机大鼠分为手术组和假手术组,其中手术组采用结扎心脏左前降支30min后复灌2h的方法进行模型建立,假手术组除不结扎心脏左前降支外,其余操作与手术组相同。其次,根据地磁活动的不同强度,将每组大鼠又随机分为强辐射组(Dst指数=500nT)、中辐射组(Dst指数=150nT)、弱辐射组(Dst指数=1 10nT)、正常组(Dst指数=0-20nT)、屏蔽组(Dst指数=0nT)。最后,将各组大鼠放入相应的磁场环境中辐射24h。2、辐射结束后,每组取5只大鼠,使用Langendorff仪监测大鼠的血流动力学参数,在测定前进行抽血及分离血清,测定后取心肌缺血区,将血清和心肌组织放入-80℃冰箱中保存备用。3、每组取6只大鼠,其中3只采用伊文氏蓝染色-TTC双染法对心脏进行染色,拍照后计算心肌缺血及心肌梗死面积。取另外3只大鼠的心脏进行脱水,常规石蜡包埋、切片,进行HE染色,于显微镜下观察心肌组织的形态变化。4、用全自动生化仪检测大鼠血清中心肌梗死标志物(CK、LDH)的浓度。5、用相应试剂盒检测大鼠血清中的氧化应激相关物质:SOD、MDA、NO。6、用相应Elisa试剂盒检测大鼠血清中的炎症因子:IL-1、IL-6、TNF-α。7、分别使用qPCR和Western blot检测心肌组织中的TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κB、TNF-α、MCP-1 的 mRNA 和蛋白的表达水平。8、使用SPSS21.0软件进行统计学分析,计量资料使用均数±标准差(x± s)表示,多组间进行比较时使用单因素方差分析,而后使用LSD-t检验进行两两比较,如P<0.05则认为实验结果具有统计学差异。[结 果]1、与正常手术组相比,强辐射手术组大鼠LVDP降低、+dp/dtmax降低、-dp/dt max升高(P<0.05),弱辐射手术组大鼠LVDP升高、+dp/dtmax升高、-dp/dt max 降低(P<0.05);2、经TTC双染后,手术组与假手术组比较,心肌缺血面积与梗死面积之间有明显差异(P<0.05),但强辐射手术组与其他手术组比较无差异;3、HE染色结果显示,手术组的心肌纤维出现一定程度的断裂,且出现较多异型细胞,部分细胞核呈圆形,少量细胞膜边界不清。假手术组的心肌纤维连接较为紧密,异型细胞较少,大部分细胞核为梭形,细胞膜边界清晰。强辐射手术组大鼠的心肌组织受损区域较大,且异型细胞较多,而弱辐射手术组大鼠的心肌组织受损区域较小,异型细胞较少;4、弱辐射手术组大鼠血清CK、LDH的浓度低于其余手术组(P<0.05);5、从氧化应激方面来看,与正常手术组相比,弱辐射手术组大鼠血清中的SOD活力升高(P<0.05),强辐射手术组大鼠血清中MDA含量升高(P<0.05),各组大鼠间的血清NO浓度不具有明显差异;6、从血清炎症因子浓度来看,与正常手术组相比,强辐射手术组大鼠血清中IL-1、IL-6的浓度均升高(P<0.05),弱辐射手术组大鼠血清中的IL-1浓度降低(P<0.05);7、qPCR结果显示:与正常手术组相比,强辐射手术组中TLR4、TRAF6、NF-κB、TNF-α、MCP-1等mRNA表达水平上升(P<0.05),但各组之间MyD88的mRNA表达无明显差异;8、Western blot结果显示:与正常手术组相比,强辐射手术组中TLR4、TRAF6、NF-κB、TNF-α、MCP-1蛋白表达水平上升(P<0.05),弱辐射手术组中TRAF6、NF-κB、TNF-α的蛋白表达水平降低(P<0.05)。[结 论]1、地磁活动会对大鼠MI/RI产生影响,且磁场爆发强度不同对心脏产生的影响不同,从血流动力学及心肌形态学方面来看,地磁强爆发会加重MI/RI大鼠心功能及心肌细胞的损伤,而地磁弱爆发则能缓解MI/RI大鼠心功能和心肌细胞的损伤。2、地磁活动可以从氧化应激和炎症反应等方面对MI/RI产生影响,其中地磁弱爆发可降低氧化应激水平,减少炎症因子的产生,降低心肌组织的受损程度,而地磁强爆发则会提高氧化应激水平,促使更多炎症因子生成,从而加重心肌损伤程度。3、地磁活动可能通过TLR4/NF-κB信号通路对大鼠MI/RI产生影响,但该影响可能不通过MyD88介导。
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