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目的:吸毒已成为危害极大的社会问题，戒断综合症的消除是困扰吸毒戒断的一个难题。长期吸毒引起的成瘾和戒断综合症表现之一就是痛觉过敏；最近许多研究证明海马结构参与了伤害性感觉的调控；为探讨吗啡成瘾的痛觉过敏是否与海马结构齿状回(DG)毒蕈碱受体有关，本实验采用了吗啡成瘾模型，应用了行为学、电生理学和免疫组织化学的方法，探讨了胆碱能药物、海马DG与吗啡成瘾、戒断症状产生的关系及在痛觉调制的作用，将为阿片类药物成瘾机制的理论研究提供新的科学依据。
方法:应用行为学方法观察评价吗啡成瘾自然戒断模型；应用玻璃微电极细胞外记录的电生理学方法，观察吗啡成瘾大鼠海马DG区域的痛反应神经元的放电表现，即痛兴奋神经元(PEN)的频率净增值(NIV)、潜伏期和痛抑制神经元(PIN)的NIV、抑制时程(ID)的改变，以及蕈碱激动剂和拮抗剂对痛反应神经元的影响；应用免疫组织化学的方法观察成瘾大鼠模型DG区毒蕈碱1受体蛋白、c-fos蛋白和p-CREB蛋白的改变。实验分成3个部分。第1部分，评价吗啡成瘾自然戒断模型:实验动物随机分成两组，实验组和对照组，各11只大鼠，实验组使用6天累进注药方法制作吗啡成瘾模型；对照组注射等体积的生理盐水。第2部分，记录吗啡成瘾大鼠的痛相关神经元放电改变:大鼠随机分为两个组，对照组(N=48)和吗啡成瘾组(N=48)。每个组，又随机分为相同数量的4个小组，分别是:生理盐水对照组:DG区注射0.85%的生理盐水1μl；乙酰胆碱(ACh)组，DG区注射0.2μg/μl的Ach1μl；阿托品组:DG区注射1.0μg/μl阿托品1μl；毛果芸香碱组:DG区注射0.4μg/μl毛果芸香碱1μl。第3部分，观察吗啡成瘾模型大鼠海马DG区的组织结构和蛋白表达改变:实验使用20只大鼠，随机均分为实验组和对照组，实验组制作吗啡成瘾自然戒断模型，脑切片作HE染色和组织化学染色。
结果:吗啡成瘾大鼠，自然戒断18小时到66小时，戒断症状得分的总分与对照组相比均有显著性差异，其中自然戒断18小时两组的得分分别为8.00±0.87和27.55±1.37(P<0.05)；对照组的体重259.4±14.3g明显高于成瘾组216.8±13.2g(P<0.05)。海马DG内注射浓度为0.2μg/1μl的ACh1μl，或者注射浓度为0.4μg/1μl毛果芸香碱1μl，可以减少刺激坐骨神经诱发的海马DG区痛相关神经元PEN的NIV(P<0.05)，延长潜伏期(P<0.05)；增加PIN的NIV(P<0.05)，减少ID(P<0.05)。当DG区注射1.0μg/1μl的阿托品1μl时恰好表现相反的效应:PEN的NIV增加(P<0.05)、潜伏期缩短(P<0.05)；PIN的NIV减少(P<0.05)、ID延长(P<0.05)。吗啡成瘾组比对照组大鼠海马DG区痛相关神经元PEN的NIV平均增加24.6%，潜伏期平均减少35.7%； PIN的NIV平均减少43.9%，而ID平均增加35.5%，均有显著性差异。吗啡成瘾大鼠海马DG区痛相关神经元对胆碱能物质的反应性质与对照组相同；但吗啡成瘾大鼠海马DG区PEN的NIV和潜伏期以及PIN的NIV和ID对胆碱能药物的最大反应幅度均较对照组减小，且有明显性差异(P<0.05)。吗啡成瘾大鼠海马DG区的c-fos蛋白和p-CREB蛋白表达增加，而毒蕈碱受体1(M1)蛋白表达减少。
结论:根据以上实验结果，可以得到以下结论:(1)大鼠用累进剂量的吗啡注射6天后，18小时自然戒断大鼠与对照组的戒断评分已有显著差异，所以可以作为吗啡成瘾自然戒断的大鼠模型；(2)海马DG区域存在痛相关神经元，即PEN和PIN；(3)胆碱能物质参与了DG区的痛觉信息调控，胆碱能受体激动剂毛果芸香碱能使PEN放电的NIV减少、潜伏期延长，而PIN的NIV增加、ID缩短；胆碱能受体拮抗剂阿托品起到相反的作用；(4)吗啡成瘾大鼠的痛相关神经元对痛反应更加敏感，可能是吗啡成瘾中枢痛敏的一种表现；(5)吗啡成瘾大鼠中海马DG区痛反应神经元对胆碱能药物的反应方式与对照组大鼠相同，但是对胆碱能药物的敏感性降低了，表现为PEN的NIV和潜伏期以及PIN的ID和NIV改变的最大幅度缩小了；(6)吗啡成瘾大鼠海马DG区的痛相关神经元对胆碱能物质的不敏感可能与M1受体表达减少有关，也说明M受体在海马DG区痛觉调制中可能起关键作用；(7)吗啡成瘾大鼠海马DG区的痛相关神经元对伤害性刺激的敏感性加强以及对胆碱能物质的不敏感，也可能与c-fos蛋白和p-CREB蛋白的高表达有一定关系。