【摘 要】
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该论文报道的研究工作确立了包括水稀释、微滤、超滤、盐析以及离子交换等主要分离步骤组成的分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的新方法.在卵黄水溶性部分(WSF)的制备工艺中,对
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该论文报道的研究工作确立了包括水稀释、微滤、超滤、盐析以及离子交换等主要分离步骤组成的分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的新方法.在卵黄水溶性部分(WSF)的制备工艺中,对水稀释法中影响WSF脂含量和总蛋白得率的四个因素:pH、稀释倍数、静置时间和氯化钠浓度进行考察;并尝试采用微孔过滤法取代常规的高速冷冻离心来分离脂类和水溶性部分.最后确定最佳工艺条件为:卵黄10倍稀释、pH5.3、氯化钠浓度为0,充分混合,经-18℃冷冻处理6h后,于4-15℃下解冻,添加5％硅藻土,以0.45μm的混合纤维素酯膜进行抽滤.最大过滤速度达80ml/cm<2>·h.去脂率>96％,总蛋白得率>80％.对WSF的浓缩以及杂蛋白的除去分别采用超滤法和盐析法.研究了操作参数(压力、温度、时间)对透液速率的影响;选择5万分子截留量超滤膜、单段间歇式超滤,对WSF浓缩5倍后,IgY的截留率约为100％,与原WSF相比IgY纯度提高到19.7％;再通过不同饱和度硫酸铵进行盐析,最后确定硫酸铵饱和度为45％,对WSF盐析后,除去了大部分38kD、53kD、70kD的杂蛋白成分.最后,采用DEAE-Sepharose F.F.离子交换柱,0.01M、pH6.5-7.0的THB缓冲液上样平衡,0.22M、pH6.5-7.0的THB缓冲液洗脱,经SDS-PAGE检验为单一条带.最终IgY总回收率为61.2％.该论文分离过程没有使用有机溶剂,其他化学试剂使用很少,方法简单、成分低,总回收率较高,纯化效果好,有望实现IgY的规模化生产.
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