脂肪组织不仅是被动的能量储存器官,也是能分泌多种生物活性因子的内分泌器官。脂肪组织对生物体内能量代谢起着重要的调控作用,脂肪组织发育异常可引发肥胖、心血管疾病和II型糖尿病等相关疾病。脂肪组织的发育是一个动态平衡过程,这一过程受到许多激素、基因和信号通路的调控。近来研究表明,Wnt/β-catenin信号通路在脂肪组织发育中起着重要的调节作用。因此,本试验以自然肥胖程度最高的动物——猪为研究对象,利用石蜡切片HE染色,冰冻切片油红O染色,石蜡切片免疫组化,细胞培养,SQ RT-PCR,Western Blot等细胞生物学和分子生物学技术,在明确猪脂肪组织发育的形态学和组织学规律的基础上,研究Wnt/β-catenin信号通路相关基因在猪脂肪组织发育过程中的表达规律,探讨其在猪脂肪组织发育过程中的调控作用。主要研究结果如下:1. 1日龄时,脂肪组织中含有大量的前体脂肪细胞和基质微管成分(SVF),前体脂肪细胞体积小,核大而间质少,只分化为多室脂肪细胞,多室脂肪细胞开始聚集脂滴,随着日龄的增长,多室脂肪细胞迅速形成单室脂肪细胞,30日龄时两种细胞几乎各占1/2,此时单室脂肪细胞聚集脂滴的能力增强。到60日龄时,单室脂肪细胞为脂肪组织中的主要细胞。2.随着个体日龄的增长,脂肪细胞主要转录因子PPARγ、C/EBPα及LPL mRNA的表达量逐渐升高,与此同时,脂肪组织中Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、Fz1、GSK3βmRNA的表达量逐渐降低,60日龄以后,维持在一个较低的水平,同时,在前体脂肪细胞和SVF细胞中,Wnt/β-catenin信号通路中第二信使β-catenin蛋白的表达强度逐渐减弱,并且表达部位由核、质均表达逐渐只在细胞质中表达,而成熟脂肪细胞中始终未检测出β-catenin蛋白的表达。这表明Wnt/β-catenin信号通路相关基因在猪脂肪组织发育的早期(1~60日龄)高表达,随着脂肪组织的发育,其表达量逐渐降低(~120日龄)。3. TNF-α在脂肪细胞分化的前48 h内抑制脂肪细胞的分化,其作用呈剂量依赖型,最佳浓度为5 ng/mL。干扰Wnt/β-catenin信号通路中第二信使β-catenin基因使TNF-α抑制脂肪形成的作用受阻,从而证实其抑制作用是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来完成的。4.用RT-PCR方法克隆出猪β-catenin基因全长CDS序列,GenBank的登陆号为EU431333。这为构建猪β-catenin基因的表达载体,进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在猪脂肪组织发育过程中的作用及机理奠定了基础。