高表达Mn-SOD肝细胞模型的构建及应用

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活性氧物质(ROS)是生物体内氧的某些代谢产物和一些反应的含氧产物的总称,与细胞凋亡、细胞周期、信号转导,细胞分化、衰老等很多生理学现象密切相关,一般被认为是具有有害和有利双重作用的。过度的氧化应激将导致细胞的坏死,而适度的氧化应激则诱导细胞增殖。ROS处于一个动态平衡中是其行使正常功能所必须,其中超氧阴离子(O2-)是胞内氧化压力的重要来源,并能通过反应转化为其他各类ROS。作为活性氧的一种清除剂,超氧化物歧化酶能够催化超氧阴离子O2.-反应生成H2O2和水,在降低胞内O2.-水平和胞内氧化压力起到重要的作用,尤其是位于线粒体的Mn-SOD,是清除ROS第一道防线,几乎任何癌的Mn-SOD都明显低于正常,而且也有研究表明Mn-SOD可提高细胞对氧应激反应的耐受性。在本研究中,我们通过转染含有Mn-SOD的真核表达质粒进入肝细胞HepG2,构建出高Mn-SOD表达的肝细胞模型,证明Mn-SOD在双氧水的刺激下对线粒体活性存在保护作用,具有较高Mn-SOD水平的细胞相对Mn-SOD缺乏的细胞而言具有对双氧水的细胞毒性更好的抵抗作用。此外,我们用流式细胞仪检测转染Mn-SOD对细胞中ROS水平和细胞周期的影响,为了寻找Mn-SOD抗氧化作用的具体信号通路,我们用Western检测了Akt的磷酸化的状态,用RT-PCR检测了转录因子的表达水平。实验显示,Mn-SOD的高表达抑制Akt的磷酸化和降低氧化敏感转录因子c-Fos/c-Jun和p65的表达水平,这些结果表明Mn-SOD通过降低ROS水平,调节Akt的磷酸化从而抑制转录因子c-Fos/c-Jun and p65的表达,终致抗氧化能力的提高。
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