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人脑钠肽（hBNP）是心力衰竭时人体分泌的作为代偿功能的一种内源性多肽。hBNP与其特异性钠尿肽受体结合,引起细胞内cGMP水平升高和平滑肌舒张,改善患者的症状。hBNP的药用价值已被肯定,但因其稳定性差、生物利用度低,体内半衰期仅为18 min,提示需以hBNP为药物前体,设计其成药分子,促进hBNP分子的药物化。本论文采用人血清白蛋白（HSA）融合技术设计了4种重组人脑钠肽（rhBNP）新药物分子--HSA融合rhBNP（rhBNP-HSA）,并对其制备方法进行了研究。主要研究结果如下:针对hBNP分子量小,易被肾脏排泄、成药性差的缺陷,设计了4种HSA融合rhBNP新药物分子。通过基因重组技术,构建了4种新药物分子的融合基因,分别为hsa-（bnp）2、bnp-hsa、（bnp）2-hsa和（bnp）4-hsa,并插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,获得了融合蛋白重组表达质粒。电击转化毕赤酵母GS115,筛选获得高表达融合蛋白菌株（GS115/pPIC9K -hsa-（bnp）2,156 mg/l;GS115/pPIC9K-bnp-hsa,212 mg/l;GS115/pPIC9K-（bnp）2-hsa,161 mg/l;GS115/pPIC9K-（bnp）4-hsa,47 mg/l）。摇瓶发酵的优化条件研究确定发酵步骤为:菌株接种于YPD培养基,30°C,200 r/min培养28 h,静置沉降,菌体沉淀复溶于含2%甲醇的BMMY培养基,体积浓缩1.5倍,30°C,200 r/min摇床诱导培养,每24 h补加2%甲醇,诱导72h后收获目的蛋白。建立了融合蛋白分离纯化的技术路线:发酵液离心后用截留分子量为10 kDa的biomax超滤膜浓缩20倍,Blue Sepharose亲和层析聚集HSA融合分子,产品纯度达到治疗性生物制品的要求（纯度≥95%）,蛋白回收率≥56%。建立了rhBNP细胞活性分析法,通过定量分析小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7中iNOS和TNFαmRNA水平的抑制强度,来判断rhBNP活性高低,发现HSA-（BNP）2有较高的生物活性。体内降压实验也证明HSA-（BNP）2有一定的降压作用。建立了超微量检测融合蛋白HSA-（BNP）2完整分子的双抗夹心ELISA方法,其检测范围在0.625200μg/ml之间。初步应用于啮齿类小鼠药代动力学rhBNP融合蛋白HSA-（BNP）2血药浓度分析,其血浆半衰期为2.14 h,与BNP单体在小鼠血浆中的半衰期3.1 min相比,融合蛋白的血浆半衰期延长了40倍。