中华人民共和国药典 2005 年版规定，中药草豆蔻来源于姜科植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata 的干燥近成熟种子团，中药绵马贯众来源于鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨Dryopteris crassirhizoma Nakai的干燥根茎及叶柄残基。但药材市场上这两种中药材的使用品种较为混乱，目前常用的鉴定方法主要是性状、显微、理化等方法。但由于混伪品常来源于与正品亲缘关系相近的物种，并且药材经过加工后的性状特征难以辨认、许多活性成分遭到失活或损失，使得上述方法往往难以准确鉴定。为此，我们分别对草豆蔻和绵马贯众进行DNA分子鉴定研究，旨在建立准确、可行的DNA分子鉴定方法。 本论文包括两个部分：第一部分：中药草豆蔻的DNA分子鉴定研究；第二部分：中药绵马贯众的DNA分子鉴定研究。 第一部分：中药草豆蔻的DNA分子鉴定研究 首先，我们在前期研究的基础上，对6个不同居群的共14个草豆蔻样品和2个不同居群的共2个艳山姜样品的rDNA ITS区序列进行测定，并运用DNA分析软件分别对草豆蔻各居群样品、草豆蔻与同一亚属各物种以及草豆蔻与艳山姜、云南草蔻的ITS区序列进行分析。分析结果显示，该区序列在草豆蔻各居群样品间较为稳定、高度保守，而在草豆蔻与同一亚属各种间却有较好的种间分辨率，因此作为中药草豆蔻种间鉴定的标记物是适宜的。此外，草豆蔻的ITS区序列有7个特异性识别位点，可用于草豆蔻位点特异性鉴定研究，这就为之后进行的草豆蔻及其混淆品的位点特异性PCR鉴定研究打下了良好的基础。 其次，我们对中药草豆蔻及其混伪品进行了位点特异性PCR鉴定研究，建立了草豆蔻中药材及其混伪品的位点特异性PCR鉴定方法。根据草豆蔻与艳山姜、云南草蔻的rDNAITS区序列数据，找到草豆蔻特异性识别位点，设计了一对专用于草豆蔻鉴定的PCR引物。采用CTAB法或简化的CTAB法，从草豆蔻及混伪品的种子团中提取得到质量可靠的总DNA。在鉴定研究中，先对草豆蔻、艳山姜及云南草蔻进行位点特异性PCR鉴定研究，确定了特异性PCR反应条件；接着对购自3个不同药材市场的商品草豆蔻药材进行特异性鉴定，并准确的鉴定了药材的真伪。 第二部分：中药绵马贯众的DNA分子鉴定研究 运用MEGA3.1软件对自测的叶绿体DNA rpcL吐序列以及GenBank中收载的国产鳞毛蕨属植物相关序列进行了系统发育分析，采用Kimura’s 2-Parameter算法得到各分类群序列成对比较的遗传距离，并在此基础上构建了NJ树。分析结果显示，叶绿体DNA rbcL吐基因用于国产鳞毛蕨属植物的系统学研究是适合的，具有明显的种间分辨率，该基因在中药绵马贯众DNA分子鉴定研究中具有重要的价值，可作为鉴定的分子标记。 我们对中药绵马贯众及其常见混伪品叶绿体DNA的rbcL吐基因序列进行了分析与鉴定研究，同时也对正伪品贯众的trnL-F基因间隔区序列进行了分析与鉴定研究。运用MEGA3.1等DNA分析软件对自测定序列及从GenBank中下载的序列进行了分析与鉴定研究。分析结果显示，此两种叶绿体DNA基因均能有效的鉴定绵马贯众及其混伪品，这就为正伪品贯众的鉴定提供了良好的DNA分子标记，为深入开展贯众类中药多品种的DNA分子鉴定打下基础。 此外，我们还对现已收集到的部分蕨类植物进行了DNA分子鉴定研究。共测定得到了7种蕨类植物的叶绿体DNA rbcL吐基因序列和其中3个物种的trnL-F基因间隔区序列，并运用DNA分析软件进行了分析。结果显示，此两种基因在绵马贯众与蕨类植物各物种间均有明显的差异，能有效地进行种间鉴定，可为正品贯众的鉴定提供良好的DNA分子标记。根据基因序列构建得到的系统树(NJ或MP树)较为直观的反映了各物种间的系统发育关系，即阔鳞肋毛蕨、鳞毛蕨属各物种首先聚在一起，接着与鳞毛蕨科不同属各物种聚在一起，最后才与不同科的各个物种聚在一起。