肝素对脂多糖诱导内皮细胞通透性增高的保护作用

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前言   脓毒症(sepsis)是创伤、烧伤、休克、感染、大手术等临床急危重患者的严重并发症,目前为非心脏科ICU中的第二位死亡原因。虽然近几年临床上进行了大量的研究,仍缺乏有效的治疗方法,依然以非特异性支持治疗为主。脓毒症患者常常出现严重的进行性体腔及组织水肿,而随着水肿的发展,增加了氧输送及弥散的距离,导致组织缺氧,加重器官功能的损害眨。导致水肿的原因,是由于在脓毒症或系统性炎症反应综合症的发生发展过程中,血液中脂多糖、凝血酶及某些致炎细胞因子浓度增高,导致血管内皮通透性增高,血浆蛋白大量外渗,从而造成组织水肿。   内皮细胞广泛存在于血管壁内面,具有半透膜样屏障功能,参与控制血液与组织间液体、电解质及蛋白的交换。内皮细胞完整性的保持,是由细胞与细胞、细胞与胞外基底膜间的粘附力和内皮细胞的收缩力这两种力量决定。近年研究证实,肝素除了具有公认的抗凝血、抗血栓作用,还具有抗炎、免疫调节、抑制细胞增殖、抗肿瘤转移等多种生物学活性和药理作用。它还可以通过抑制白细胞黏附活化,抑制补体的激活,保护血管内皮细胞免受趋化因子、组胺、细菌内毒素及氧自由基等损伤,以及维持内皮细胞完整性等。本研究试图探讨肝素在保护内皮细胞通透性方面的作用。   材料与方法   一、细胞培养   人脐静脉内皮细胞购于上海拜力生物技术公司。生长于含10%胎牛血清的DMEM培养基中。置于培养箱中,每隔1-2日换液。   二、分组   人脐静脉内皮细胞株传代培养后随机分4组(n=5),施以相应处理:①对照组(加入等量PBS);②内毒素组(LPS10mg/L);③肝素组(UFH10kU/L);④内毒素及肝素组(UFH10kU/L+LPS10mg/L)。   三、实验方法   用MTT法测定内皮细胞活性;用transwell小室法测定单层内皮细胞通透性;用免疫荧光染色法测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)形态。   四、统计学分析   所有实验均重复3次以上,计量数据以均数±标准误表示,两组间均数比较采用两样本均数t检验,多组问均数比较采用多个样本均数方差分析。P<0.05认为有统计学意义。   实验结果   与空白对照组比较,LPS10mg/L及100mg/L对细胞活性起到明显的抑制作用(0.695±0.015、0.476±0.030比0.860±0.053,P<0.05和P<0.01),肝素100kU/L对内皮细胞活性产生抑制作用(0.675±0.030比0.840±0.023,P<0.05)。LPS10mg/L可增加单层内皮细胞通透性,于4h时达峰值,与空白组比较差异有统计学意义(5.882±0.101比4.489±0.015,P<0.01),并能增加细胞骨架应力纤维的形成;而应用肝素10kU/L预处理后,在2~12h时单层内皮细胞的通透性较LPS组降低(2h:4.382±0.053比5.084±0.129,4h:4.628±0.044比5.882±0.101,6h:4.381±0.089比5.479±0.125,12h:4.447±0.054比4.719±0.08,P<0.05),并能减少内皮细胞骨架的重排及应力纤维的形成。结论肝素可以减轻LPS诱导单层内皮细胞通透性增高及细胞骨架重排,对内皮细胞屏障功能起到保护作用。   结论   普通肝素可以减轻LPS诱导单层内皮细胞通透性增高及细胞骨架重排,对内皮细胞屏障功能起到保护作用。
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