【摘 要】
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浮舰蛋白(Flotillin-1)属于SPFH超家族,它作为脂筏的标记蛋白,能依赖脂筏形成多聚体,为许多信号通路相关蛋白提供相互作用的平台,有促进细胞增殖、轴突再生和T细胞激活等功能
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浮舰蛋白(Flotillin-1)属于SPFH超家族,它作为脂筏的标记蛋白,能依赖脂筏形成多聚体,为许多信号通路相关蛋白提供相互作用的平台,有促进细胞增殖、轴突再生和T细胞激活等功能。Flotillin-1的研究多见于高等脊椎动物,而圆口纲无颌类的七鳃鳗作为在脊椎动物进化史上承上启下的模式动物,对于动物的起源进化和生理功能的研究具有很高的价值,但目前Flotillin-1在七鳃鳗体内的分布和功能还并不明确。本次研究通过分子克隆获得了七鳃鳗Flotillin-1(L-Flotillin-1)全长3596bp,包含Prohibitin和Flotillin两个结构域,并且高度保守。构建了p Cold-Ⅰ-L-Flotillin-1原核表达载体并纯化了L-Flotillin-1包涵体蛋白,验证了人类的Flotillin-1抗体对L-Flotillin-1仍具有特异性,免疫荧光和Western blot实验证明L-Flotillin-1在七鳃鳗脂筏和外泌体都有表达,提示L-Flotillin-1可以像其他物种一样在七鳃鳗中作为脂筏和外泌体的标记分子。免疫组化实验验证在七鳃鳗体内L-Flotillin-1广泛分布,并通过Real-time PCR实验发现LPS免疫七鳃鳗后,L-Flotillin-1 m RNA在肠组织中明显上调,提示L-Flotillin-1可能参与了肠组织对于细菌的防御作用。另外,构建p EGFP-N1-L-Flotillin-1真核表达载体并转染Hela细胞使L-Flotillin-1过表达,共聚焦显微镜和高内涵分析观察到细胞变圆皱缩,微管断裂,荧光强度减弱,提示L-Flotillin-1可能通过调节骨架的排列来改变细胞形态;通过流式细胞术和高内涵显微镜检测到L-Flotillin-1的过表达使癌细胞出现凋亡的现象,但具体机制未知,流式细胞术检测显示并没有影响细胞周期;并且Real-time PCR检测发现L-Flotillin-1的过表达能够上调VCAM-1和ICAM-1两种粘附分子,说明L-Flotillin-1能够直接调控粘附分子,并且可能参与了炎症的促发和癌细胞的迁移。七鳃鳗中L-Flotillin-1的分布及功能研究可为其它物种Flotillin-1的研究提供新的资料。
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