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第一部分白藜芦醇对人Tenon’s囊成纤维细胞增殖和凋亡的影响目的：探讨白藜芦醇(RES)对行体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞(HTFs)的增殖以及凋亡的影响,并比较在不同浓度白藜芦醇及不同作用时间时,HTFs增殖和凋亡的变化情况。方法：取青光眼患者术中切下的Tenon’s囊组织标本,组织贴壁法行人Tenon’s囊成纤维细胞的体外培养,选取传代后第3代或第6代细胞。1.MTT比色法检测白藜芦醇对HTFs增殖作用的影响：分别用10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml不同浓度的RES干预体外培养的HTFs,12h,24h,36h,48h不同时间观察HTFs的增殖情况,并采用MTT比色法检测HTFs的生长活性。2.浓度为10ug/ml,20ug/ml,40ug/ml,80ug/ml的白藜芦醇对体外培养的HTFs作用24h后,运用AO-EB、Hochest33258染色及Annexion V-碘化丙锭双染色流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果:1.MTT检测法结果显示：在浓度为10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml的白藜芦醇干预体外培养的HTFs,作用时间为12h-48h时,与对照组相比,细胞生长受到显著抑制(p<0.05),在该浓度和时间范围内,显示为时间和剂量依赖性,即随着作用时间的延长和药物浓度的增加,其对细胞生长增殖的抑制程度也加强。浓度为20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml的白藜芦醇作用12h细胞抑制率分别为9.62%,18.86%,29.05%,51.05%；作用24h,细胞抑制率分别为13.86%,23.53%,34.76%,54.14%,作用36小时分别为16.86%,29.17%,40.88%,62.72%,48h是则分别为23.18%,32.35%,59.20%,,69.05%；2. AO/EB和Hochest33258染色法结果显示：10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml白藜芦醇作用体外培养的成纤维细胞24h后,可见细胞细胞核固缩,或呈碎块状致密浓染,并随着药物浓度的增加,凋亡现象越明显；3.Annexin V-碘化丙锭双染色流式细胞术结果：浓度为10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml的白藜芦醇干预体外培养的HTFs24小时,可促进成纤维细胞的细胞凋亡,伴随RES药物浓度的增加,凋亡率与对照组相比显著升高(P<0.05)。结论：在一定的药物浓度和作用时间范围内,白藜芦醇可对体外培养的人筋膜囊的成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,表现为剂量-时间依赖性,并可促进细胞的凋亡,凋亡也呈剂量依赖性。第二部分白藜芦醇对人Tenon’s囊成纤维细胞中TGF-β基因表达的影响目的：探讨白藜芦醇对人Tenon’s囊成纤维细胞中TGF-β基因表达的影响。方法：组织贴壁法培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的分为对照组、药物组,分别于正常培养及不同浓度药物(10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml)干扰条件下培养24h后,运用western blot和real-time PCR法检测细胞中TGF-β1和TGF-β2的蛋白和mRNA表达水平。结果：药物组与对照组相比,TGF-β1和TGF-β2的蛋白和mRNA水平均有表达变化。与对照组比较,不同浓度药物(10μg/ml,20μg/ml)干扰后,TGF-β1的蛋白水平降低了33.51%-62.21%(P<0.05),mRNA表达变化较对照组降低了40.12%-63.15%(P<0.05)；TGF-β2的蛋白水平降低了38.53%-72.13%(P<0.05), mRNA表达变化较对照组降低了42.33%-68.16%(P<0.05)。结论：白藜芦醇显著抑制人Tenon’s囊成纤维细胞中TGF-β1和TGF-β2的蛋白和mRNA的表达。