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研究背景:宫颈癌是全球女性中第三大常见癌症和癌症死亡的第四大原因,约占新发癌症数的9%、女性癌症总死亡人数的8%。宫颈癌发病和死亡的病例中超过85%发生在发展中国家。全球癌症数据表明我国作为最大的发展中国家,宫颈癌发病率及死亡率远远高于平均水平。已有研究表明,长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)在肿瘤发生、发展中起着关键调控作用;NEAT1是一种位于细胞核内的LncRNA,参与多种癌症的发生发展;然而,NEAT1在宫颈癌中的生物学功能尚未得到充分研究。此外PI3K/AKT/m TOR信号通路作为促进肿瘤细胞增殖、迁移的重要通路,调控多种LncRNA的生物学作用,参与肿瘤的发生发展过程。研究目的:检测LncRNA NEAT1在人类宫颈癌组织或细胞中的表达水平,总结LncRNA NEAT1与宫颈癌患者的临床病理特征及总体存活率之间的关系;并在上述研究基础上,进一步明确LncRNA NEAT1对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响,探索其生物学作用分子机制并进行靶向干预,为宫颈癌的临床诊治提供新的靶点。研究方法:(1)收集我院62名宫颈癌患者癌组织及癌旁组织标本(要求癌旁组织距癌中心组织距离>5cm),收集时间为2012年9月到2017年9月;患者术前未进行放疗、化疗等相关治疗,同时收集62例宫颈癌患者的相关临床资料,建立数据库并进行统计归纳分析,运用q RT-PCR检测宫颈癌标本组织的LncRNA NEAT1的表达水平,并与癌旁组织做对比;(2)培养四种宫颈癌细胞(He La,ME-180,Si Ha,Ca Ski)、正常宫颈上皮细胞(H8),运用q RT-PCR检测它们的LncRNA NEAT1的表达水平,并用SPSS软件(版本19.0,IBM Corp,Armonk,NY,USA)进行统计学分析,重复3次测量,数据以x±s表示;(3)评估62名宫颈癌患者LncRNA NEAT1的表达水平与临床病理各参数(病理类型、FIGO分级、肿瘤大小、分化程度、淋巴转移等)的关系,此外运用Kaplan-Meier方法分析NEAT1表达水平与患者总体存活期之间的相关性;(4)将si-NEAT1的质粒转染到Ca Ski和He La细胞,使Ca Ski和He La细胞低表达LncRNA NEAT1,将pc DNA-NEAT1转染至Si Ha细胞,使Si Ha细胞高表达LncRNA NEAT1,采用q RT-PCR检测转染效率,使用MTT法、集落形成实验测定细胞增殖能力;transwell法、划痕实验测定检测上述细胞的迁移能力;并与空白对照组细胞作对比;(5)运用Western blot检测低表达LncRNA NEAT1及过表达LncRNA NEAT1宫颈癌中PI3K/AKT/m TOR信号通路活化情况;(6)应用PI3K/AKT/m TOR信号传导途径的激活剂和抑制剂IGF-1和LY294002处理低表达LncRNA NEAT1及过表达LncRNA NEAT1宫颈癌细胞,运用MTT法、集落形成实验测定细胞增殖能力;transwell法测定检测上述细胞的迁移能力;并与空白对照组细胞作对比。研究结果:(1)LncRNA NEAT1在人宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中高表达,LncRNA NEAT1的高表达预示了宫颈癌病人的不良预后(P=0.005,χ~2=7.735);(2)低表达LncRNA NEAT1的Ca Ski细胞细胞活性从0.592±0.257降至0.360±0.091,细胞集落数从136.667±13.503降至71.667±7.506(t=-18.76,P=0.003),迁移能力从100.333±9.866降低至58.333±5.859(t=-8.08,P=0.015);低表达LncRNA NEAT1的He La细胞活性从0.516±0.208降至0.328±0.069(t=2.98,P=0.041),细胞集落数从128.667±13.317降至65.667±7.024(t=-5.54,P=0.031),迁移能力从123.667±12.097降至67.667±7.095(t=-6.03,P=0.026);高表达LncRNA NEAT1的Si Ha细胞的细胞存活率从0.314±0.013增加到0.728±0.146(t=12.16,P=0.017),细胞集落数84.667±12.014增加到150.667±18.037(t=7.27,P=0.018);迁移能力从127.333±16.042升至231.333±31.786(t=4.92,P=0.039)。裸鼠成瘤实验证实:低表达LncRNA NEAT1细胞株的瘤体生长情况明显比高表达LncRNA NEAT1细胞株的瘤体要迟缓;(3)在低表达LncRNA NEAT1的Ca Ski和He La细胞中,PI3K/AKT/m TOR信号表达减弱,在高表达LncRNA NEAT1的Si Ha中,PI3K/AKT/m TOR信号表达增强,定量分析结果具有显著的统计学差异;在低表达LncRNA NEAT1的Ca Ski和He La细胞中,PI3K/AKT/m TOR信号传导途径的激活剂IGF-1能够增强细胞的增殖、迁移能力;在高表达LncRNA NEAT1的Si Ha细胞中,PI3K/AKT/m TOR信号传导途径的抑制剂LY294002能够抑制细胞的增殖、迁移能力。结论:1.在人宫颈癌组织和各类宫颈癌细胞系中LncRNA NEAT1表达上调;2.LncRNA NEAT1表达水平高低与宫颈癌患者的临床病理特征及总体存活率相关;3.过表达或者敲低LncRNA NEAT1影响宫颈癌细胞增殖和迁移能力;4.LncRNA NEAT1与宫颈癌中PI3K/AKT/m TOR信号通路的激活相关;5.PI3K/AKT/m TOR信号通路参与LncRNA NEAT1调节宫颈癌细胞增殖、迁移能力;6.LncRNA NEAT1在宫颈癌发生发展中可能发挥了癌基因的作用,LncRNA NEAT1可能是宫颈癌的一个新的治疗靶点,且与PI3K/AKT/m TOR信号通路密切相关。