目的：初始CD4+T细胞接受抗原刺激后，首先分化为Th0细胞，在不同的细胞因子作用下，可分化为Th1、Th2、Th17及Treg细胞，发挥不同的生物学作用。Treg细胞具有免疫抑制作用，主要功能是维持免疫耐受和免疫稳态，并与类风湿关节炎(RA)密切相关。Treg细胞是由CD4+T细胞在TGF-β的作用下分化而来，而叉状/翼状螺旋转录因子(FOXP3)是检测CD4+T细胞向Treg细胞分化程度的特异性转录因子。　　 前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)均为花生四烯酸的代谢产物，是RA病程中的重要炎症介质。目前，临床上多用非甾体类抗炎药治疗RA，其作用机制正是通过抑制环氧化酶进而抑制PGE2的生成。有研究表明，应用LTB4受体阻断剂可以治疗RA。本室以往研究证实，PGE2通过前列腺素受体EP2和EP4抑制Th0细胞向Treg细胞分化，参与机体的免疫调节。LTB4可抑制Th0分化为Treg细胞，且抑制胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠Th0细胞分化为Treg细胞，参与机体免疫调节。那么，PGE2和LTB4是否可以调节人CD4+T细胞向Treg细胞的分化，目前尚无文献报道，因此本课题以人外周血CD4+T细胞为研究对象，观察PGE2和LTB4对Treg细胞分化的影响，进而确定PGE2和LTB4是否通过调节Treg细胞的分化，参与人体的免疫调节，以期进一步揭示二者在RA中的免疫调节作用。　　 方法：　　 1、PGE2对Treg细胞分化的调节　　 (1)免疫磁珠法分选人外周血CD4+T细胞，流式细胞术检测分选细胞的纯度；收集分选后的细胞，接种于anti-CD3预先包被的24孔板，加入anti-CD28和TGF-β1，诱导CD4+T细胞向Treg细胞分化，于不同时间收集细胞，观察FOXP3 mRNA的时间依从性表达；收集分选后的细胞，接种于anti-CD3预先包板的24孔板，加入anti-CD28、TGF-β1和IL-2，7d后收集细胞，流式细胞术检测CD4+CD25+FOXP3+细胞数量。　　 (2)不同浓度PGE2对Treg细胞分化的影响。PGE2对Treg细胞FOXP3mRNA表达的影响：分为四组，对照组和PGE2(0.1μM、1μM、10μM)组，孵育36h，收集细胞，观察FOXP3mRNA的表达情况；不同时间10μMPGE2对Treg细胞分化的影响：分为对照组和PGE210μM组，于不同时间收集细胞，观察FOXP3mRNA的表达情况；PGE2对CD4+CD25+FOXP3+细胞数量的影响：分为四组，对照组和PGE2(0.1μ.M、1μM、10μM)组，培养7d，收集细胞，流式细胞术观察CD4+CD25+FOXP3+细胞的数量。　　 2、LTB4对Treg细胞分化的调节LTB4对Treg细胞FOXP3 mRNA表达的影响：分为四组，对照组和LTB4(0.01μM、0.1μM、1μM)组，孵育36h，收集细胞，观察FOXP3mRNA的表达情况；LTB4对CD4+CD25+FOXP3+细胞数量的影响：分为四组，对照组和LTB4(0.01μM、0.1μM、1μM)组，培养7d，流式细胞术检测CD4+CD25+FOXP3+细胞的数量。　　 应用SPSS13.0软件进行统计学分析，数据用均数±标准差表示，各组均数的比较行单因素方差分析(one-way ANOVA)，用最小显著差法(LSD)作两两比较，P＜0.05为有显著性差异。　　 结果：　　 1、PGE2对Treg细胞分化的调节　　 (1)经磁珠分选后，流式细胞仪检测CD4+T细胞的纯度达97％以上；在anti-CD3和anti-CD28，TGF-β1作用下Treg细胞关键转录因子FOXP3 mRNA在36h达表达高峰；在anti-CD3和anti-CD28存在的条件下，TGF-β1和IL-2作用7d后，可使(72.9533±17.2270)％的细胞同时表达CD4、CD25和FOXP3，证明体外成功诱导CD4+T细胞分化为Treg细胞。　　 (2)不同浓度的PGE2在CD4+T细胞诱导分化为Treg细胞36h时均对FOXP3 mRNA的表达有抑制作用，且呈剂量依赖性，PGE2(0.1μM、1μM、10μM)组(0.8544±0.0745、0.6972±0.1047、0.2220±0.0377)与对照组(1.0000±0.0000)相比差异均有统计学意义；不同时间10μM PGE2对Treg细胞FOXP3mRNA的表达均有抑制作用，且在7d时抑制作用最明显，5d和7d时，PGE210μM组(4.1127±0.5213、3.6510±0.5057)与对照组(10.0970±1.7363、21.0310±4.1888)相比，有显著差异;PGE2作用7d，流式细胞术检测CD4+CD25+FOXP3+细胞的数量：发现PGE2(0.1、1、10μM)组均可减少CD4+CD25+FOXP3+细胞的数量，且呈剂量依赖性，PGE21μM和10μM组(41.4933±9.5664、23.9367±5.3066)％与对照组(72.9533±17.2270)％相比差异有统计学意义。　　 上述结果显示PGE2抑制CD4+T细胞向Treg细胞的分化。　　 2、LTB4对Treg细胞分化的调节　　 不同浓度的LTB4在CD4+T细胞诱导分化为Treg细胞36h时，LTB4(0.01μM、0.1μM、1μM)组(0.9757±0.2335、1.0058±0.1900、1.0779±0.2348)与对照组(1.0000±0.0000)相比，差异无统计学意义;LTB4作用7d后，应用流式细胞术检测CD4+CD25+FOXP3+细胞的数量，发现LTB4(0.01μM、0.1μM、1μM)各组(78.7000±12.9752、76.5200±9.9611、77.8133±13.8570)％与对照组(72.9533±17.2270)％相比，无显著差异。　　 上述结果显示LTB4对CD4+T细胞向Treg细胞的分化无明显影响。　　 结论：　　 (1)通过磁珠分选人外周血CD4+T细胞，成功诱导其向Treg细胞分化，首次证实PGE2对Treg细胞的分化有抑制作用，且呈剂量依赖性。　　 (2)本实验未检测到LTB4对Treg细胞的分化有调节作用。