背景:主动脉瓣疾病是一类常见的心脏瓣膜疾病。随着医疗卫生水平的改善,退行性瓣膜病已取代风湿性瓣膜病成为主动脉瓣疾病的主要病因。钙化性主动脉瓣疾病是退行性主动脉瓣疾病最具代表性的表现之一。华法林引起的心脏瓣膜钙化是临床上不容忽视的新不良反应,但目前对其机制的研究尚未被充分认识。目的:本研究旨在探究肿瘤抑制因子p53在华法林诱导的主动脉瓣钙化病变中所发挥的作用。方法:体外分离培养猪的主动脉瓣膜间质细胞,采用不同滴度的腺病毒感染猪主动脉瓣膜间质细胞过表达p53后,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平进而确定p53过表达程度。给予华法林1.Oumol/L诱导猪主动脉瓣间质细胞钙化,通过ALP活性检测、茜素红染色、钙含量检测明确p53在钙化中的作用。收集钙化后的RNA进行荧光定量PCR检测钙化相关指标RUNX2、SOX9、BMP2等表达情况。收集总蛋白进行Western blot实验,检测钙化相关指标的表达情况以及相关信号通路关键分子p21,AKT以及Slug等的表达。进一步收集核蛋白对组蛋白乙酰化水平进行检测。采用染色质免疫共沉淀方法探究p53参与调控的表观遗传学相关分子机制。通过构建p53干扰腺病毒感染猪主动脉瓣间质细胞后诱导钙化,进行ALP活性检测、茜素红染色、钙含量检测、RNA水平和蛋白水平检测以及染色质免疫共沉淀实验进一步明确p53在钙化中的作用。构建Slug干扰腺病毒与p53过表达腺病毒共同感染猪瓣膜间质细胞诱导钙化后观察p53的作用是否被逆转。结果.:通过流式检测确定了瓣膜间质细胞中p53的低水平过表达程度不会显著诱导AVIC凋亡的表达水平。ALP活性、钙含量检测以及茜素红染色结果表明低水平过表达p53明显促进了华法林诱导的猪瓣膜间质细胞的钙化程度。RNA水平以及蛋白水平结果显示p53显著促进了瓣膜间质细胞的成骨分化基因的表达。同时过表达p53可以显著激活组蛋白H3,H4的乙酰化水平,升高核内Slug的水平。下调细胞内p53的表达水平后则可以减轻瓣膜间质细胞的钙化。并且通过Western blot以及染色质免疫共沉淀实验表明钙化后p53明显激活Slug的转录水平。下调slug表达显著抑制了过表达p53引起的瓣膜间质细胞钙化。结论:我们的研究提示肿瘤抑制因子p53可直接激活Slug的转录,从而促进了华法林诱导的瓣膜钙化作用,为临床上深入了解华法林诱导的心脏瓣膜钙化和寻找新的干预方法提供理论依据。