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鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫引起的肠道细胞内寄生原虫病,对家禽养殖业危害严重。目前该病主要防治手段为疫苗接种和抗生素的使用,疫苗接种存在“散毒传毒”问题,而抗生素长期广泛使用又会造成耐药虫株产生,导致出现药物残留等食品安全问题,严重影响人体健康。所以寻找替代抗生素的新型抗球虫治疗方法成为重中之重。已有实验证明乳酸菌在抑制艾美耳球虫入侵方面效果显著。本实验分离白羽肉鸡盲肠内乳酸菌,通过耐酸性、人工胃液肠液、胆盐耐受性、抑菌性及细胞粘附性实验确定菌株益生特性,依据活菌数确定乳酸菌复合比例。通过柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella,E.tenella）雏鸡感染模型评价复合乳酸菌抗球虫效果,主要研究内容及结果如下:本实验于厌氧条件下,从成年白羽肉鸡盲肠内容物中分离菌株,采用形态学观察及16S r RNA基因序列分析鉴定及筛选菌株,结果显示,共筛选到3株乳酸菌分别为:唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius HO 66,L.salivarius HO 66）、罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri,L.reuteri）、短小乳杆菌（Lactobacillus brevis ATCC 14869,L.brevis ATCC 14869）。并对菌株抑菌能力、粘附性、耐受性进行评价,以活菌数量为标准确定乳酸菌复合比例。L.reuteri、L.salivarius HO 66和L.brevis 14869,对p H1.5-5耐受性测试后活菌数量分别为1×10~3、1×10~4及1×10~3CFU/m L,说明3株乳酸菌在酸度耐受性方面表现良好。L.reuteri、L.salivarius HO 66和L.brevis 14869在胃液培养6h后活菌数可达1×10~6、1×10~7及1×10~6CFU/m L。在人工肠液中培养6h后活菌数分别为1×10~8、1×10~7及1×10~5 CFU/m L表现出较强活力,说明3株乳酸菌可在肠液及胃液中存活。胆盐耐受性实验中L.reuteri、L.salivarius HO 66及L.brevis 14869在胆盐浓度为0.5状态下活菌数分别为1×10~8、1×10~5和1×10~5 CFU/m L,表明3株乳酸菌均对胆盐具有极强耐受性。抑菌结果显示,3株乳酸菌对大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）抑菌直径分别为12mm、17mm及12 mm,均达到中度敏感水平;对沙门氏菌（Salmonella）抑菌直径分别为17mm、22mm、11mm,均达中度敏感或高度敏感水平以上;抑制金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）直径分别为13.4 mm、18 mm及11.7 mm,达到中度敏感或高度敏感水平。根据以上结果说明3株乳酸菌具有抑制S.aureus、Salmonella及S.aureus感染潜力。L.reuteri、L.salivarius HO 66、L.brevis 14869经粘附性测试后对DF-1粘附率均达15%以上。依据以上测试结果将:L.reuteri、L.salivarius HO 66与L.brevis 14869菌株按照（2:2:1、1:1:1、3:1:1）比例进行混合培养,经滴板计数后活菌数分别为1×10~8、1×10~7及1×10~6 CFU/m L,根据结果可知复合菌比例为2:2:1时活菌数最高。45只1日龄雏鸡随机分为PBS组、攻虫组、复合乳酸菌组。雏鸡从3日龄起PBS组、攻虫组每只隔日灌服1 m L PBS,复合乳酸菌组每只灌服1 m L复合乳酸菌（1×10~9CFU/mL）。攻虫组及复合乳酸菌组于14日龄口服接种E.tenella卵囊5×10~4个/只。分别于14日龄、21日龄取鸡外周血液进行流式细胞术检测,检测攻虫前、后各组CD4+T细胞及CD8+T细胞含量;攻虫后每天监测各组雏鸡体重变化,于攻虫后第七天对各组相对增重率、盲肠病变计分、雏鸡盲肠病理变化、抗球虫指数（ACI）等指标进行评价。流式细胞术检测结果显示:口服复合乳酸菌组能够增加健康雏鸡外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞数量,但与PBS组及攻虫组相比差异不显著（p＞0.05）。攻虫后复合乳酸菌组与攻虫组相比CD8+T细胞水平含量显著上升（p＜0.001）。鸡只平均增重率及相对增重率经计算,复合乳酸菌组为34±14.92（95%）与攻虫组相比18.9±8.33（52%）相比有明显上升（p＜0.01）。同时复合乳酸菌组与攻虫组相比卵囊排出量显著减少38%（p＜0.0001）。通过盲肠病变计分可知复合益生菌组（病变值为20）相较于攻虫组（30）病变状态有明显减轻,且差异显著（p＜0.05）。H＆E染色及病理切片显示复合乳酸菌组可见球虫卵囊数量减少,炎性浸润症状明显减轻,经ACI指数判定复合乳酸菌组指数为165为良好水平。本研究研制的复合乳酸菌经口服免疫雏鸡后可显著提升相关抗球虫免疫细胞水平,提高雏鸡增重、减轻雏鸡盲肠病变和减少卵嚢排出,具有良好的抗球虫效果,为抗球虫微生态制剂的应用奠定了基础。