论文部分内容阅读
目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。环境因素暴露、个体遗传易感性和表观遗传的改变在乳腺癌的发病中起着重要的作用。micro RNA是一类重要的表遗传物质可以调控人类基因组中约30%的基因,在肿瘤中发挥抑癌基因或促癌基因的作用。在前期的工作中,通过大规模的病例对照研究我们发现位于mi R-502和SET8结合靶序列中的基因多态性位点(rs16917496)与乳腺癌早期发病风险相关,提示SET8可能受到mi R-502的调控。目前,mi R-502和SET8在乳腺癌中的相互作用关系、临床意义尚待阐明。在本研究中,我们对mi R-502-SET8在乳腺癌中的相互作用以及在乳腺癌中的预后作用进行研究,为寻找乳腺癌治疗的潜在靶点提供依据。方法:本研究从天津医科大学肿瘤医院选取279例经病理学诊断确认为原发性女性乳腺癌患者,分别对每位患者进行流行病学问卷调查。通过查阅病历获得相应临床病理资料,通过电话随访或从门诊检查记录获得相应随访信息。用实时定量PCR技术检测279例乳腺癌组织(包括60对癌和癌旁配对组织)的mi R-502和SET8的RNA表达水平。western blot技术检测27对乳腺癌与癌旁组织中的SET8蛋白的表达水平。卡方检验分析mi R-502和SET8的RNA表达水平与临床病理资料的关联性,Kaplan-Meier法分析mi R-502和SET8基因的RNA表达水平与乳腺癌患者术后总体生存及无病生存的关联。荧光素酶报告基因实验,实时定量PCR以及western blot技术验证SET8为mi R-502直接调控的靶基因。细胞增殖、细胞周期和侵袭迁移相关实验用于研究mi R-502靶向SET8在乳腺癌中的功能。以上实验均重复三次,P值小于或等于0.05时结果有统计学差异。结果:1、mi R-502在乳腺癌组织中的表达水平显著低于相应癌旁组织中的表达水平(P<0.0042)。SET8在乳腺癌组织中的m RNA和蛋白表达水平均高于相应癌旁组织中的表达水平(P<0.0001、P=0.0531)。在乳腺癌组织中mi R-502的表达水平与SET8的表达水平显著负相关(Pearson r=-0.19,P=0.0014)。mi R-502的表达水平与诊断年龄、绝经状态和细胞增殖性抗原PCNA表达情况相关(P值分别是0.027、0.042和0.020),并且mi R-502高表达水平的乳腺癌病人的预后有优于低表达病人的趋势(OS:P=0.298;DFS:P=0.741)。SET8的m RNA表达水平与雌激素受体(ER)状态及PCNA表达情况相关(P值分别是0.025、0.015),SET8低表达乳腺癌病人的预后要明显的优于高表达病人的预后(OS:P=0.049;DFS:P=0.0017)。2、荧光素酶报告基因实验结果表明SET8为mi R-502调控的靶基因,实时定量PCR技术和western印迹实验进一步证实mi R-502可以靶向SET8并对其产生负调控作用。mi R-502靶向SET8,下调SET8的表达使乳腺癌细胞在S期阻遏,并抑制细胞的增殖、侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)过程。结论:mi R-502和SET8与乳腺癌的发病和预后相关。mi R-502靶向SET8,下调SET8的表达使乳腺癌细胞在S期阻遏,并抑制细胞的增殖、侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)过程。