论文部分内容阅读
卵巢癌发病率居妇科恶性肿瘤的第三位,然而其病死率却居首位,5年生存率不足30%。在世界范围内,每年新发病例约有225500例,其中死亡病例约有140200例。在其病理分类中,上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)约占85%～90%。抗体介导的靶向治疗是用单克隆抗体作为药物来抑制肿瘤的生长或用单抗作为药物载体将药物导向肿瘤细胞,研究认为它可作为肿瘤治疗的新方法。人滋养层细胞表面抗原 2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)是一种细胞表面跨膜蛋白,在卵巢癌组织中表达率为66%,但在正常组织中表达率很低。有文献报道,它是一种肿瘤相关基因,可促进肿瘤细胞生长、侵袭及转移。因此,Trop-2在卵巢癌靶向治疗中有潜在的应用价值。目的:1.利用基因工程技术制备全人源抗Trop-2 IgG抗体。2.体外验证抗Trop-2 IgG对卵巢癌细胞特性的影响。方法:1.构建全人源抗Trop-2 IgG真核表达载体并鉴定载体序列的正确性。2.利用293F细胞大量表达抗Trop-2 IgG并将抗体纯化。3.用SDS-PAGE、ELISA、亲和力检测、免疫荧光、流式细胞术等方法分析抗体Trop-2 IgG免疫学特性。4.用CCK-8、细胞划痕实验、Transwell侵袭、迁移、细胞凋亡实验等方法分析检测抗Trop-2 IgG对卵巢癌细胞生物学特性的影响。结果:1.成功构建了 pFUSE-CHIg-hG1-Trop-2H 和 pFUSE-CLIg-h K-Trop-2 K 真核表达质粒,经测序,其序列与预先设计的序列一致。2.成功表达了抗Trop-2IgG抗体,产率约为50mg/L。3.经鉴定,抗Trop-2IgG效价较高,与Trop-2蛋白的结合具有量效关系;亲和力KD为2.699×10-M;能够特异性识别并结合高表达Trop-2的卵巢癌细胞HO8910。4.抗Trop-2IgG可在较高浓度下抑制HO8910细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。当抗体浓度为400μg/ml时,细胞的生存率仅为55.95%(P<0.01),划痕愈合率仅为24.71%(对照组为70.80%,P<0.01),迁移和侵袭细胞个数是明显少于对照组(P<0.05),细胞凋亡率是对照组的2倍(P<0.05)。结论:1.成功制备了全人源抗Trop-2IgG抗体,并验证了该抗体的免疫学特性。2.初步证明本研究制备的抗Trop-2 IgG可在较高浓度下抑制卵巢癌细胞的恶性行为,在卵巢癌的靶向治疗中有潜在的应用价值。